METHOD FOR PRODUCING ANTIBODY FUSION PROTEIN

• Main Authors: SONODA, HIROYUKI, HATANO, YUKICHI, KAKIMOTO SHINJI, FUKUI, TSUYOSHI, KOSHIMURA, YURI, MATEV, MIROSLAV
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 01.03.2018
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

[Problem] To provide a method for producing a fusion protein obtained by fusing an antibody with a lysosomal enzyme. [Solution] A method for producing a fusion protein obtained by fusing an antibody with a human lysosomal enzyme, wherein the production method includes (a) a step for culturing mammalian cells that produce the fusion protein in serum-free medium to cause the fusion protein to be secreted in the culture broth, (b) a step for recovering the culture supernatant by removing the mammalian cells from the culture broth, and (c) a step for purifying the fusion protein from the culture supernatant using column chromatography in which a material to which is bonded a substance having an affinity for the fusion protein is used as the stationary phase, column chromatography in which a material having an affinity for phosphate groups is used as the stationary phase, and size-exclusion column chromatography. Le problème décrit par la présente invention est de fournir un procédé de production d'une protéine de fusion obtenue par fusion d'un anticorps avec une enzyme lysosomale. La solution selon la présente invention porte sur un procédé de production d'une protéine de fusion obtenue par fusion d'un anticorps avec une enzyme lysosomale humaine, le procédé de production comprenant (a) une étape de culture de cellules de mammifère qui produisent la protéine de fusion dans un milieu sans sérum pour amener la protéine de fusion à être sécrétée dans le bouillon de culture, (b) une étape de récupération du surnageant de culture par élimination des cellules de mammifère du bouillon de culture, et (c) une étape de purification de la protéine de fusion à partir du surnageant de culture à l'aide d'une chromatographie sur colonne dans laquelle un matériau auquel est liée une substance ayant une affinité pour la protéine de fusion est utilisé en tant que phase stationnaire, chromatographie sur colonne dans laquelle un matériau ayant une affinité pour des groupes phosphate est utilisé en tant que phase stationnaire, et une chromatographie sur colonne d'exclusion stérique.