A METHOD FOR HIGH LEVEL AND STABLE GENE TRANSFER IN LYMPHOCYTES

• Main Authors: IVICS, ZOLTAN, HUDECEK, MICHAEL
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 30.03.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The method disclosed herein describes a novel technology offering unparalleled efficiency, flexibility, utility and speed for the stable integration of transgenes into lymphocytes and other mammalian cells. The novel method is based on the use of an mRNA-encoded transposase (e.g. sleeping beauty transposase) in combination with a minicircle DNA-encoded transposable element. The novel method enables higher gene-transfer rates and is at the same time less toxic than the conventional approach, which is the use of plasmid DNA- encoded transposase in combination with a plasmid DNA-encoded transposable element. Applications of the invention include but are not limited to the stable integration of a transgene encoding an immune receptor (e.g. a T-cell receptor or synthetic chimeric antigen receptor) into human T lymphocytes, with the immune receptor conferring specificity for a molecule expressed by a tumor cell. The transposase mRNA and transposon minicircle DNA may be introduced into lymphocytes by methods including but not limited to electrotransfer such as electroporation and nucleofection. Le procédé décrit dans la présente invention concerne une nouvelle technologie offrant une efficacité, une souplesse, une utilité et une vitesse inégalées pour l'intégration stable de transgènes dans les lymphocytes et autres cellules de mammifère. Le nouveau procédé est basé sur l'utilisation d'une transposase codée par ARNm (par exemple la transposase "sleeping beauty") en combinaison avec un élément transposable codé par l'ADN minicercle. Le nouveau procédé permet d'obtenir des taux de transfert de gènes plus élevés et est en même temps moins toxique que l'approche classique qui consiste à utiliser la transposase codée par l'ADN plasmidique en combinaison avec un élément transposable codé par l'ADN plasmidique. Les applications de l'invention comprennent, mais pas exclusivement, l'intégration stable d'un transgène codant pour un récepteur immunitaire (par exemple un récepteur des lymphocytes T ou un récepteur d'antigène chimérique synthétique) dans des lymphocytes T humains, le récepteur immunitaire conférant une spécificité à une molécule exprimée par une cellule tumorale. L'ARNm transposase et l'ADN minicercle du transposon peuvent être introduits dans des lymphocytes par des procédés comprenant, mais pas exclusivement, un électrotransfert tel que l'électroporation et la nucléofection.