PEPTIDE FRAGMENT CONDENSATION AND CYCLISATION USING A SUBTILISIN VARIANT WITH IMPROVED SYNTHESIS OVER HYDROLYSIS RATIO

• Main Authors: QUAEDFLIEG, PETER JAN LEONARD MARIO, JANSSEN, DIRK BAREND, VAN DER LAAN, JAN METSKE, TOPLAK, ANA, NUIJENS, TIMO, WU, BIAN
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 14.04.2016
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The invention relates to a method for enzymatically synthesizing an (oligo)peptide, comprising coupling (a) an (oligo)peptide C-terminal ester or thioester and (b) an (oligo)peptide nucleophile having an N-terminally unprotected amine, wherein the coupling is carried out in a fluid comprising water, and wherein the coupling is catalyzed by a subtilisin BPN' variant or a homologue thereof, which comprises the following mutations compared to subtilisin BPN' represented by SEQUENCE ID NO: 2 or a homologue sequence thereof : - a deletion of the amino acids corresponding to positions 75-83; - a mutation at the amino acid position corresponding to S221, the mutation being S221C or S221selenocysteine; preferably a mutation at the amino acid position corresponding to P225 wherein the amino acid positions are defined according to the sequence of subtilisin BPN' represented by SEQUENCE ID NO: 2. Further, the invention relates to an enzyme suitable for use as a catalyst in a method of the invention. L'invention concerne un procédé de synthèse enzymatique d'un (oligo) peptide, consistant à coupler (a) un ester ou thioester à extrémité C-terminale (oligo)peptidique et (b) un nucléophile (oligo)peptidique ayant une amine non protégée en position N-terminale, le couplage étant réalisé dans un fluide comprenant de l'eau, et le couplage étant catalysé par unvariant de la subtilisine BPN' ou un de ses homologues, lequel comprend les mutations suivantes par rapport à la subtilisine BPN' représentée par SEQ ID n° 2 ou une séquence homologue de celle-ci : - une délétion des acides aminés correspondant aux positions 75 à 83 ; - une mutation au niveau de la position de l'acide aminé correspondant à S221, la mutation étant sélénocystéine S221C ou S221 ; de préférence une mutation au niveau de la position de l'acide aminé correspondant à P225, les positions d'acides aminés étant définies selon la séquence de la subtilisine BPN' représentée par SEQ ID n° 2. En outre, l'invention concerne une enzyme appropriée pour être utilisée comme catalyseur dans un procédé de l'invention.