MICROORGANISMS FOR DITERPENE PRODUCTION

• Main Authors: BOER, VIKTOR MARIUS, SUIR, ERWIN
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 04.12.2014
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; FOODS OR FOODSTUFFS; FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BYSUBCLASSES A23B - A23J; HUMAN NECESSITIES; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OFNUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; THEIR TREATMENT, NOT COVERED BY OTHER CLASSES; VINEGAR; WINE

The present invention relates to a recombinant microorganism comprising one or more nucleotide sequence(s) encoding: a polypeptide having ent-copalyl pyrophosphate synthase activity;a polypeptide having ent-Kaurene synthase activity; a polypeptide having ent-Kaurene oxidase activity; and a polypeptide having kaurenoic acid 13-hydroxylase activity, whereby expression of the nucleotide sequence(s) confer(s) on the microorganism the ability to produce at least steviol, and wherein said recombinant microorganism has been modified in its genome such that it results in a deficiency in the production of one or more of: (i) a phosphatase capable of acting on geranylgeranylpyrophosphate (GGPP) resulting in the formation of geranylgeraniol (GOH); (ii) a phosphatase capable of acting on farnesylpyrophosphate (FPP) resulting in the formation of farnesol and nerolidol;(iii) an exo-1,3-ßglucanase;(iv)a glycogen synthase (or a polypeptide that influences glycogen accumulation); (v) a transcriptional repressor of hypoxic genes (ROX1) (vi) an NADPH oxidase; or (vii) a monocarboxylate transporter (JEN1) (viii) a polypeptide having activity as encoded for by the open reading frame, YJL064w; or (ix) a polypeptide The recombinant microorganism may also be capable of expressing one or more UDP-glucosyltransferases such that the microorganism is capable of producing one or more steviol glycosides. La présente invention concerne un microorganisme recombiné comprenant une ou plusieurs séquences nucléotidiques codant pour un polypeptide à activité ent-copalyl pyrophosphate synthase; un polypeptide à activité ent-kaurène synthase; un polypeptide à activité ent-kaurène oxydase; et un polypeptide à activité acide kaurénoïque 13-hydroxylase. L'expression de la ou des séquences nucléotidiques confère au microorganisme la capacité de produire au moins du stéviol. Le microorganisme recombiné est modifié au niveau de son génome pour entraîner un déficit de production concernant : (i) une phosphatase capable d'agir sur le géranylgéranyl-pyrophosphate (GGPP) avec pour résultat la formation de géranylgéraniol (GOH); et/ou (ii) une phosphatase capable d'agir sur le farnésyl-pyrophosphate (FPP) avec pour résultat la formation de farnésol et de nérolidol; et/ou (iii) une exo-1,3-ßglucanase; et/ou (iv) une glycogène synthase (ou un polypeptide agissant sur l'accumulation du glycogène); et/ou (v) un répresseur de la transcription des gènes hypoxiques (ROX1); et/ou (vi) une NADPH oxydase; et/ou (vii) un transporteur de monocarboxylate (JEN1); et/ou (viii) un polypeptide possédant l'activité encodée par le cadre de lecture ouvert, YJL064w; et/ou (ix) un polypeptide. Ledit microorganisme recombiné peut également se révéler capable d'exprimer une ou plusieurs UDP-glucosyltransférases de façon à pouvoir produire un ou plusieurs glycosides de stéviol.