METHODS AND PRIMER SETS FOR HIGH THROUGHPUT PCR SEQUENCING

• Main Authors: SEITZ, VOLKHARD, HUMMEL, MICHAEL, HENNIG, STEFFEN, RITTER, JULIA-MARIE
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 02.03.2021
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMBINATORIAL CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES, IN SILICOLIBRARIES; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The invention relates to a method for amplifying a target nucleic acid sequence tn-tC-tV-tC'-tn' comprising a first amplification using a first primer pair with sequence ma-K-pC and ma-K'-pC', and a subsequent second amplification using a second primer pair with sequence aL-aP-aK and aL'-aP'-aK', wherein pC is the same sequence as sequence element tC. pC and pC' are 8 to 40 nucleotides in length, K comprises a 3'-terminal sequence k1-k2-s, s is a mismatch sequences preventing PCR bias, ak is the same sequence as sequence element k1, aP-aK hybridize to a contiguous sequence on sequence element ma-K, k1 is 2 to 9 nucleotides in length, aL and aL' can be any sequence, and tV is a variable region within said target nucleic acid sequence. The invention further relates to collections of primer sets for use in the method of the invention. L'invention concerne un procédé d'amplification d'une séquence d'acide nucléique cible tn-tC-tV-tC'-tn' comprenant une première amplification au moyen d'une paire d'amorces ayant les séquences ma-K-pC et ma-K'-pC', et une seconde amplification consécutive au moyen d'une seconde paire d'amorces ayant les séquences aL-aP-aK et aL'-aP'-aK', dans lesquelles pC représente la même séquence que l'élément de séquence tC. pC et pC' ont une longueur de 8 à 40, K comprend une séquence 3'-terminale k1-k2-s, s représente des séquences de mésappariement empêchant un biais de PCR, ak représente la même séquence que l'élément de séquence k1, aP-aK s'hybride à une séquence contiguë sur l'élément de séquence ma-K, k1 a une longueur de 2 à 9 nucléotides, aL et aL' peuvent être des séquences quelconques et tv est une région variable dans ladite séquence d'acide nucléique. L'invention concerne en outre des collections de jeux d'amorces destinées à être utilisées dans le procédé de l'invention.