IMPROVED PURIFICATION OF COLLAGENASES FROM CLOSTRIDIUM HISTOLYTICUM LIQUID CULTURE

• Main Authors: ECKSTEIN, HELLMUT, SUPPMANN, BERNHARD, FISCHER, MICHAELA, THALHOFER, JOHANN-PETER, HOELKE, WERNER, LIEHRE, ANTJE
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 13.09.2016
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIRCHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES; MEASURING; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PHYSICS; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; TESTING; VINEGAR; WINE

The present invention provides a method for purifying Clostridium histolyticum collagenase type I and type II proteins from a complex mixture by subsequently performing a precipitation with ammonium sulfate, hydrophobic interaction chromatography, cation exchange chromatography, and anion chromatography. Conditions are provided which lead to a stabilized partially purified preparation even after the precipitation step. The method of the invention leads to a quick and efficient removal of other proteolytic activities. The preparations according to the invention provide exceptionally pure and intact collagenase type I and type II proteins which are enzymatically active. The invention also provides blends of the two isolated proteins. The invention further provides the use of the purified collagenase proteins or blends thereof for treating a tissue sample in vitro. La présente invention concerne une méthode de purification de protéines de type I et de type II de collagénase de Clostridium histolyticum à partir dun mélange complexe, en effectuant de façon subséquente une précipitation avec du sulfate dammonium, une chromatographie hydrophobe, une chromatographie par échange de cation et une chromatographie anionique. Des conditions sont prévues pour mener à une préparation purifiée partiellement stabilisée même après létape de précipitation. La méthode de linvention mène à un retrait rapide et efficace des autres activités protéolytiques. Les préparations de la présente invention donnent des protéines de type I et type II de collagénase exceptionnellement pures et intactes, qui sont actives du point de vue enzymatique. De plus, linvention concerne des mélanges des deux protéines isolées. En outre, linvention concerne lutilisation des protéines de collagénase purifiée ou de mélanges connexes pour traiter un échantillon de tissu in vitro.