Métodos para fabricar aav

• Main Authors: DZIOPA FLORIAN, LEEWIS BASTIAAN, VALINHAS ANA
• Format: Patent
• Language: Portuguese
• Published: 05.03.2024
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

a presente invenção se refere a métodos para produzir partículas de vírus adenoassociado recombinante (raav) que incluem: uma fase de expansão que inclui aumentar o número de células em pelo menos um recipiente de cultura que contém o meio de cultura; introduzir nas células uma primeira sequência polinucleotídica que inclui um transgene flanqueado por repetições terminais invertidas de aav e, opcionalmente, uma segunda sequência polinucleotídica que inclui genes rep e cap de aav e/ou uma terceira sequência polinucleotídica que inclui um ou mais genes auxiliares; uma fase de produção que inclui cultivar as células nas quais a uma ou mais sequências polinucleotídicas foram introduzidas e adicionar íons de cálcio (ca) (isto é, sais de ca2+) ao meio de cultura de fase de produção; e isolar as partículas de raav. Methods for producing recombinant adeno-associated virus (rAAV) particles include: an expansion phase including increasing the number of cells in at least one culture vessel containing culture medium; introducing into the cells a first polynucleotide sequence including a transgene flanked by AAV inverted terminal repeats, and optionally a second polynucleotide sequence including AAV rep and cap genes, and/or a third polynucleotide sequence including one or more helper genes; a production phase including culturing the cells into which the one or more polynucleotide sequences were introduced and adding calcium (Ca) ions (i.e., salts of Ca2+) to the production phase culture medium; and isolating the rAAV particles.