SELEÇÃO POR KNOCK-IN DE GENE ESSENCIAL

• Main Authors: MARK JAMES TOMISHIMA, CONOR BRIAN MCAULIFFE, CLAUDIO MONETTI, JOHN ANTHONY ZURIS, CARRIE MARIE MARGULIES, PETER TONGE, CHEW-LI SOH
• Format: Patent
• Language: Portuguese
• Published: 13.12.2022
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

SELEÇÃO POR KNOCK-IN DE GENE ESSENCIA. A presente invenção refere-se a estratégias, sistemas, composições e métodos para produção eficiente de clones celulares knock-in sem genes repórteres. Um gene essencial é alvejado com o uso de um cassete knock-in que compreende uma sequência de codificação exógena para um produto gênico de interesse (ou "sequência de carga") no quadro com e a jusante (3') de uma sequência de codificação exógena ou sequência de codificação parcial do gene essencial. Even-tos de alvejamento indesejados criam uma versão não funcional do gene essencial, em essência um knock-out, que é "resgatado" pela integração correta do cassete knock-in, que restaura a região codificadora do gene essencial para que um produto gênico funcional seja produzido e posiciona a sequência de carga no quadro com e a jusante da sequência de codificação do gene essencial. Strategies, systems, compositions, and methods for efficient production of knock-in cellular clones without reporter genes. An essential gene is targeted using a knock-in cassette that comprises an exogenous coding sequence for a gene product of interest (or "cargo sequence") in frame with and downstream (3′) of an exogenous coding sequence or partial coding sequence of the essential gene. Undesired targeting events create a non-functional version of the essential gene, in essence a knock-out, which is "rescued" by correct integration of the knock-in cassette, which restores the essential gene coding region so that a functional gene product is produced and positions the cargo sequence in frame with and downstream of the essential gene coding sequence.