UN METODO PARA OBTENER ERITROPOYETINA DE ALTA ACTIVIDAD ESPECIFICA Y UN METODO PARA EL ANALISIS Y DETECCION DE ERITROPOYETINA DE DIFERENTE ACTIVIDAD ESPECIFICA

• Main Authors: SEIGELCHIFER, MAURICIO A, SAMELA, ANDREA S, GUERRA, FABIANA K
• Format: Patent
• Language: Spanish
• Published: 22.12.2004
• Edition: 7

Un método para obtener eritropoyetina de alta actividad específica por separación de isoformas de eritropoyetina de diferente actividad específica, mediante la realización de una cromatografía de fase reversa, utilizando una columna de fase reversa y un equipo apropiado, dicho método comprende: a) equilibrar la columna de fase reversa con una mezcla de solventes, b)sembrar la muestra conteniendo las diferentes isoformas de eritropoyetina; y c) realizar un gradiente aumentando la cantidad de uno de los solventes orgánicos en la mezcla a una velocidad menor al 0,5% por minuto, manteniendo la concentración del otro solvente orgánico entre el 0,05 y 0,5%. Es un objeto de la presente la utilización de una etapa de RP-HPLC, desarrollada de modo tal que permite la separación de isoformas de menor actividad específica, logrando preparaciones farmacéuticas de alta pureza y actividad específica. La utilización de un gradiente muy lento permite una separación clara de diferentes isoformas de EPO, lo que es absolutamente novedoso. Es otro objeto de la presente que dicha metodología puede ser utilizada a nivel analítico para determinar la presencia de dichas isoformas en preparaciones comerciales de EPO. Por un lado, se obtienen preparaciones de EPO con alta actividad específica. Esto es debido a que se logra la eliminación de isoformas de EPO de menor actividad específica. Permite, además obtener preparaciones más homogéneas, reduciendo la dispersión del peso molecular, comparado con la técnica de intercambio iónico. Permite además, el realizar análisis directo de la producción de las diferentes isoformas en los medios de cultivo.