狭缝引导配体1-3’非翻译区抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

目的研究狭缝引导配体1（Slit1）的3’非翻译区序列部分片段（Slit1-3’UTR）对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调节作用和可能机制。方法利用腺病毒介导在ICR乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达Slit1-3’UTR 1526nt序列（Slit1-3’UTR 1526nt），使用蛋白质免疫印迹技术评估mCFs中胶原Iα1/（COL1A1）、胶原IIIα1/（COL3A1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等纤维化相关基因的表达水平，结合EdU和Trans-well实验评估对mCFs增殖和迁移能力的影响。利用血管紧张素II（Ang Ⅱ）处理mCFs，检测Slit1-3’UTR 1526n...

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Published inZhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 46; pp. 466 - 474
Main Authors 王娅, 伍华燕, 高原, 吴茹诗, 关佩莹, 李晖, 方俊涛, 单志新
Format Journal Article
LanguageChinese
Published Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 01.05.2025
Subjects
3’ 非翻译区（3’UTR）
微RNA
心肌成纤维细胞
心肌纤维化
狭缝引导配体1（Slit1）
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ISSN1672-3554

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Summary:目的研究狭缝引导配体1（Slit1）的3’非翻译区序列部分片段（Slit1-3’UTR）对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调节作用和可能机制。方法利用腺病毒介导在ICR乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达Slit1-3’UTR 1526nt序列（Slit1-3’UTR 1526nt），使用蛋白质免疫印迹技术评估mCFs中胶原Iα1/（COL1A1）、胶原IIIα1/（COL3A1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等纤维化相关基因的表达水平，结合EdU和Trans-well实验评估对mCFs增殖和迁移能力的影响。利用血管紧张素II（Ang Ⅱ）处理mCFs，检测Slit1-3’UTR 1526nt对于Ang Ⅱ处理mCFs中纤维化表型的影响。过表达Slit1-3’UTR 1526nt后转染miR-34a-5p的类似物，放线菌素D干预实验检测Slit1-3’UTR 1526nt的mRNA的稳定性。过表达Slit1-3’UTR 1526nt检测mCFs中miR-34a-5p及其靶基因SIRT1的水平。分别转染miR-34a-5p和靶向SIRT1基因的小干扰RNA（si-SIRT1），检测对Slit1-3’UTR 1526nt调控mCFs纤维化表型的影响。结果利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达Slit1-3’UTR 1526nt，过表达Slit1-3’UTR1526nt可显著抑制mCFs纤维化基因的表达和mCFs增殖、迁移能力，抑制Ang Ⅱ诱导mCFs的纤维化表型。放线菌素D实验结果显示转染miR-34a-5p降低mCFs中Slit1-3’UTR1526nt的稳定性，而过表达Slit1-3’UTR 1526nt时mCFs中miR-34a-5p水平降低。转染miR-34a-5p可促纤维化表型，并可逆转Slit1-3’UTR 1526nt对mCFs纤维化表型的抑制作用。在mCFs中过表达Slit1-3’UTR 1526nt显著升高miR-34a-5p靶基因SIRT1水平，在mCFs中分别转染miR-34a-5p和siRNA可一致性地逆转Slit1-3’UTR 1526nt抑制mCFs的纤维化表型。结论Slit1-3’UTR1526nt通过特异结合miR-34a-5p并增加其靶基因SIRT1表达发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。
ISSN:1672-3554