基于电化学生物传感技术的鱼类IHNV病毒检测方法构建

本研究旨在开发传染性造血器官坏死病毒（Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV）现场检测新技术,用于鉴定鱼类苗种是否携带IHNV,降低疫病传播风险,实现水产健康养殖管理。基于IHNV基因组序列保守性分析结果,以保守性最高的基质蛋白编码基因（matrix,M）为检测靶序列,设计了6条IHNV特异性扩增引物,对样品RNA进行逆转录等温链置换扩增。在部分引物5’端标记二茂铁分子,使扩增产物带有电化学信号,在部分底物中标记生物素分子,使扩增产物被亲和素修饰的电极表面捕获锚定,基于该原理构建了电化学生物传感体系,通过检测扩增产物的循环伏安信号,判断样品中是...

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Published in农业生物技术学报 Vol. 26; no. 2; pp. 357 - 364
Main Author 赵紫霞;许建;张研;江炎亮;陈强
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 2018
Subjects
传染性造血器官坏死病毒（IHNV）
生物传感
电化学信号
鲑科鱼类
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Summary:本研究旨在开发传染性造血器官坏死病毒（Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV）现场检测新技术,用于鉴定鱼类苗种是否携带IHNV,降低疫病传播风险,实现水产健康养殖管理。基于IHNV基因组序列保守性分析结果,以保守性最高的基质蛋白编码基因（matrix,M）为检测靶序列,设计了6条IHNV特异性扩增引物,对样品RNA进行逆转录等温链置换扩增。在部分引物5’端标记二茂铁分子,使扩增产物带有电化学信号,在部分底物中标记生物素分子,使扩增产物被亲和素修饰的电极表面捕获锚定,基于该原理构建了电化学生物传感体系,通过检测扩增产物的循环伏安信号,判断样品中是否携带IHNV。本方法能够在15 min内完成核酸扩增,且扩增反应在59-65℃的宽松温度区间内均可进行,无需精准控温,对设备和操作要求较低。在扩增温度63℃、信噪比为3的条件下,本方法最低检测限（limit of detection,LoD）为6.2 copies/μL,能够对未表现出感染症状的鲑鳟类鱼苗、鱼卵进行IHNV检测,适用于苗种场、养殖场等生产经营性场所的现场检测,在水产苗种鉴定领域具有良好的应用前景。
Bibliography:ZHAO Zi-Xia1, XU Jian1, ZHANG Yan1, JIANG Yan-Liang1, CHEN Qiang2（ 1 Key Laboratory of Aquatic Genomics, Ministry of Agriculture/Beijing Key Laboratory of Fishery Biotechnology, Chinese Academy of Fishery Sciences, Beijing 100141, China; 2 Key Laboratory of Bioactive Materials Ministry of Education/College of Life Sciences, Nankai University, Tianjin 300071, China）
Infectious hematopoietic necrosis virus（IHNV） is an economically important pathogen causing significant mortalities in a wide variety of salmonid species, including the main aquaculture species, Atlantic salmon（Salmo salar） and rainbow trout（Oncorhynchus mykiss）. Aimed to disease control and aquatic biosecurity, In this study, a new electrochemical biosensing method for IHNV on-site detection was developed to identify the IHNV-carrying salmonid fries or eggs. Based on evolutionary conservation analysis of 357 nonredundant IHNV sequences from different origins, the matrix gene（M） was found most conserved and selected as target sequence. Six IHNV spec
ISSN:1674-7968