感染鳶尾花引起嵌紋病徵之Potyvirus病毒鑑定及利用細菌表現病毒鞘蛋白製備病毒多元抗體

• Published in: 植物病理學會刊 Vol. 18; no. 4; pp. 217 - 224
• Main Authors: 江芬蘭(F. L. Ching), 陳金枝(C. C. Chen), 張清安(C. A. Chang), 鄭櫻慧(Y. H. Cheng)
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中華民國植物病理學會 01.12.2009
• Subjects: 細菌表現蛋白; Butterfly flower mosaic potyvirus; Iris japonica; bacteria expressed coat protein; polyclonal antibody; RT-PCR; 多元抗體; 鳶尾花嵌紋病毒
• ISSN: 1021-9544
• DOI: 10.6649/PPB.200912_18(4).0003

本研究於日本進口之鳶尾花植株發現黃化嵌紋病徵之葉片組織，以ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)檢測出與Potyvirus屬病毒專一性抗血清產生正反應，進一步純化罹病葉片之全量核酸，利用Potyvirus屬之廣效性引子對HRP 5/Oligo dT進行反轉錄－聚合酶鏈鎖反應(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)，將預期1.3-kb核酸產物進行選殖及定序後，獲得一核酸選殖分離株JI 2。JI 2分離株與Gen Bank上已登錄之鳶尾花嵌紋病毒（Butterfly flower mosaic virus，簡稱BFMV，序號AM774001）之鞘蛋白核苷酸與氯基酸序列相同度(identities)均大於99.6%，推測屬於相同病毒之不同系統。設計可增幅JI2全長度鞘蛋白基因之專一性引子對，經RT-PCR增幅後，將其選殖於表現載體pET28b(+)上，再轉型於E.coli Rosetta (DE3)宿主內誘導大量表現蛋白之生成，將分子量約29.5kDa之表現蛋白經兔免疫注射後，得到對應JI2之多元抗體(#162)。此多元抗體可應用於ELISA、西方轉潰法(Western blotting)，及SDS免疫擴散反應(Sodium dodecyl sulfate immunodiffusion)與同源抗原產生專一性反應。針對JI2之已知核酸序列所設計之JI-up/JI-dw引子對，利用RT-PCR可專一性地檢測出感染BFMV之鳶尾罹病組織，此等自製以JI2分離株爲來源所製備對應鳶尾花嵌紋病毒引子對及抗體，可實際應用於進口鳶尾花種球之病毒監測，提供了我國對此病毒之自主檢測能力之實質助益。