Detección y diferenciación molecular de Leptospira sp. utilizando diferentes técnicas de extracción de ADN

• Published in: Revista veterinaria Vol. 24; no. 1; pp. 53 - 55
• Main Authors: Alegre, E.A, De Biasio, M.B, Ramírez, N.N, Ruiz, R.M, Bastiani, C.E
• Format: Journal Article
• Language: Portuguese
• Published: Universidad Nacional del Nordeste, Facultad de Ciencias Veterinarias 01.06.2013
• Subjects: AGRICULTURE, DAIRY & ANIMAL SCIENCE; DNA extraction; Leptospira sp; Extracción de ADN; Molecular differentiation; Boiling; Diferenciación molecular
• ISSN: 1669-6840; 1669-6840

Existen diversas estrategias diagnósticas para identificar leptospiras, siendo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) una técnica de alta sensibilidad y especificidad. El presente trabajo tuvo como objetivo optimizar técnicas de extracción de ADN a partir de cultivos bacterianos y establecer condiciones de PCR multiplex para diferenciar leptospiras saprófitas de patógenas. Para ello se ensayaron técnicas de bromuro de cetiltrimetil amonio (CTAB) y hervido (boiling). Se analizaron dos secuencias de ácidos nucleicos, correspondientes a una fracción de un gen conservado en ambos grupos de bacterias (ARNr 16S) y otra procedente de una fracción de un gen (LipL32) presente sólo en especies de leptospiras patógenas, las cuales dieron amplicones de 474 y 430 pb respectivamente, utilizándose como controles positivos de amplificación muestras de cultivos bacterianos de Leptospira icteroahemorragiae, L. canicola y apatógena (Patoc I), utilizando agua como control negativo. Se concluyó que no existen diferencias en la perdurabilidad del ADN extraído a partir de cepas de referencia al comparar el método de digestión con el detergente CTAB y el de boiling y sus variantes. Considerando el más bajo costo y menor tiempo de desarrollo, este último resultó la mejor alternativa para la obtención de moldes para amplificación por PCR.