捻转血矛线虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

S855.9; 为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cDNA进行均一化处理,再将纯化后的cDNA与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activation domain,AD)文库.结果表明:本研究构建了重组率为100％,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×107 CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的...

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Published in浙江大学学报（农业与生命科学版） Vol. 48; no. 2; pp. 247 - 253
Main Authors 张惠, 黄艳, 周静茹, 吴飞, 童丹妮, 陈学秋, 杨怡, 马光旭, 杜爱芳
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,杭州 310058 2022
Subjects
捻转血矛线虫
蛋白质间相互作用
cDNA文库
酵母双杂交系统
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Summary:S855.9; 为构建捻转血矛线虫cDNA文库,进一步研究捻转血矛线虫蛋白互作机制以及为筛选捻转血矛线虫互作蛋白提供依据,本研究以捻转血矛线虫L3期幼虫为材料,利用TriZol法提取捻转血矛线虫总RNA;使用试剂盒构建捻转血矛线虫的cDNA文库,并对cDNA进行均一化处理,再将纯化后的cDNA与线性化的pGADT7-Rec重组构建的文库质粒转化至Y187酵母中,构建出酵母转录激活结构域(activation domain,AD)文库.结果表明:本研究构建了重组率为100％,插入片段平均长度为1000 bp,工作液细胞密度大于3.5×107 CFU/mL的捻转血矛线虫均一化酵母AD文库;所构建的表达文库各项指标均达标,符合酵母双杂交筛选要求.本文库为捻转血矛线虫的分子机制研究以及疫苗的开发奠定了基础.
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2021.03.251