不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较

S855.3; 本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性.利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent ass...

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Published in浙江大学学报（农业与生命科学版） Vol. 49; no. 6; pp. 873 - 880
Main Authors 冯梦珂, 王星博, 林璐璐, 崔明仙, 颜焰, 周继勇
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江大学动物医学中心,浙江 杭州 310058 01.12.2023
农业农村部动物病毒学重点实验室,浙江 杭州 310058
Subjects
immunoreactivity
可溶性表达
免疫反应性
CD2v protein
原核表达
非洲猪瘟病毒
soluble expression
African swine fever virus
CD2v蛋白
prokaryotic expression
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ISSN1008-9209
DOI10.3785/j.issn.1008-9209.2022.11.071

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Summary:S855.3; 本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性.利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性.结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白.临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P＜0.05).pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白.本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路.
ISSN:1008-9209
DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2022.11.071