Prrx1+牙周膜干细胞在牙移动过程中的谱系示踪

• Published in: 上海交通大学学报（医学版） Vol. 42; no. 8; pp. 1008 - 1015
• Main Authors: 汪席均, 金安婷, 黄湘如, 徐弘远, 高昕, 杨屹羚, 代庆刚, 江凌勇
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颅颌面外科,上海交通大学口腔医学院,国家口腔医学中心,国家口腔疾病临床医学研究中心,上海市口腔医学重点实验室,上海 200011%上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔第二门诊部,国家口腔医学中心,国家口腔疾病临床医学研究中心,上海市口腔医学重点实验室,上海 200011 01.08.2022
• Subjects: Cre/loxP重组酶系统; 正畸牙移动; 配对相关同源基因1; 细胞谱系示踪
• ISSN: 1674-8115
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2022.08.005

R783.5; 目的·通过Cre/loxP重组酶系统研究牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中配对相关同源基因1(paired related homeobox 1,Prrx1)阳性细胞谱系(Prrx1+细胞谱系)在小鼠牙移动过程中的动态分布.方法·利用Cre/loxP重组酶系统,将诱导型Prrx1-CreERT2小鼠与R26tdTomato荧光标记小鼠交配繁殖,并通过PCR对其子代小鼠进行基因型鉴定.取8只子代小鼠,向其腹腔注射他莫昔芬(tamoxifen,TA),以标记PDLSCs中的Prrx1+细胞谱系(即tdTomato+细胞).于小鼠上颌左侧安置加力装置[即正畸牙移动(orthodontics tooth movement,OTM)侧],右侧未加力即为对照侧,以构建小鼠OTM模型.分别于牙移动第3日(OTM 3 d)、第7日(OTM 7 d)时处死小鼠,收集其双侧上颌磨牙及周围牙周组织,经脱钙后行包埋及冰冻切片处理.采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察张力区和压力区牙周膜的改变,并利用免疫荧光染色观察Prrx1+细胞谱系在张力区及压力区的动态分布.结果·经PCR鉴定,子代小鼠基因型为Prrx1-CreERT2;R26tdTomato.随着加力装置作用的增加,OTM 7 d小鼠的牙移动距离[(87.44±4.02)μm]较OTM 3 d小鼠[(42.81±5.04)μm]明显增加,提示小鼠OTM模型构建成功.H-E染色结果显示:OTM 3 d时小鼠OTM侧压力区的牙周膜被压缩、间隙变窄,而OTM 7 d时OTM侧牙周膜宽度逐渐恢复;OTM 3 d时OTM侧张力区的牙周膜被拉伸,而OTM 7 d较OTM 3 d时牙周膜排列更规则.免疫荧光染色结果显示:OTM 3 d时OTM侧压力区牙周膜中tdTomato+细胞数量较对照侧减少,OTM 7 d时OTM侧压力区tdTomato+细胞数量较对照侧增加(均P<0.05);OTM 3 d及OTM 7 d时,OTM侧张力区tdTomato+细胞数量较对照侧均有增加(均P<0.05).结论·成功构建了Prrx1-CreERT2;R26tdTomato小鼠的OTM模型,并初步证实了Prrx1+细胞谱系参与OTM过程中的牙周改建.