鼠伤寒沙门菌中甲基化修饰调控PhoP活性的机制研究

• Published in: 上海交通大学学报（医学版） Vol. 39; no. 8; pp. 827 - 833
• Main Authors: 李建辉, 苏杨, 姚玉峰, 倪进婧
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室,上海,200025 28.08.2019
• Subjects: 毒力; PhoP; STM14_0023; 鼠伤寒沙门菌; 甲基化修饰
• ISSN: 1674-8115
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2019.08.004

R37; 目的·探究鼠伤寒沙门菌转录调控因子PhoP的甲基化修饰与其活性的相关性,筛选PhoP的甲基转移酶.方法 ·Western blotting检测不同培养条件下鼠伤寒沙门菌中PhoP的甲基化水平变化.通过生物信息学预测候选的甲基转移酶,体内过表达预测的甲基转移酶后检测phoP及其下游基因的转录水平变化,找到可能的PhoP甲基转移酶,并体外验证该甲基转移酶能否甲基化PhoP.使用real-time PCR检测高浓度Mg2+、弱酸性等培养条件下,phoP与其甲基转移酶在转录水平的相对表达变化.结果·随着培养基中Mg2+浓度升高,PhoP甲基化水平上升;而经过弱酸刺激后,PhoP甲基化水平下降.生物信息学预测并筛选到9个甲基转移酶,其中体内过表达STM14_0023后,phoP及其下游基因的转录水平下降且PhoP蛋白水平也下降,但敲除STM14_0023对上述分子的表达无影响.体外甲基化酶促反应显示STM14_0023能够甲基化PhoP,体内过表达STM14_0023后也可提高PhoP的甲基化水平,且在抑制phoP表达的高浓度Mg2+培养条件下STM14_0023的转录水平升高.结论 ·STM14_0023是PhoP的甲基转移酶,甲基化修饰抑制PhoP活性.