非小细胞肺癌A549细胞基因组不稳定性和MYC基因突变在吉西他滨耐药中的作用

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 2; pp. 355 - 363
• Main Authors: 陈宗军, 陈亚红, 黄丽云, 梁紫盈
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 海南医学院第二附属医院药学部,海南 海口 570311%海南医学院第二附属医院呼吸科,海南 海口 570311%海南医学院第一附属医院药学部,海南 海口 570216%海口市第四人民医院体检科,海南 海口 571100 28.03.2024
• Subjects: MYC augmentation; Gemcitabine; 吉西他滨; 基因组不稳定性; Cancer,non-small cell lung; MYC突变; 癌,非小细胞肺; MYC mutation; MYC扩增; Genomic instability
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20240208

R734.2; 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞基因不稳定性和MYC基因突变在吉西他滨耐药中的作用,并阐明其作用机制.方法:采用2 mg·L-1吉西他滨持续作用A549细胞(A549组),构建耐药细胞株A549R(A549R组),并将si-NC和si-MYC转染至A549R细胞,作为si-NC A549R组和si-MYC A549R组.采用CCK-8法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16和 32 mg·L-1)吉西他滨对各组细胞的抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率.转录组测序技术(RNA-seq)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析A549组及A549R组细胞中的差异表达基因,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测A549 组和A549R组细胞中基因组不稳定性相关基因错配修复基因 2(MSH2)、错配修复基因 6(MSH6)和DNA修复蛋白RAD50(RAD50)的表达水平,Western blotting法检测基因组不稳定性相关蛋白MYC原癌基因(MYC)和磷酸化组蛋白(γH2AX)的表达水平,染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测RNA polⅡ和γH2AX在MYC基因上的富集程度,PCR法扩增并检测A549R细胞MYC基因突变情况.结果:与A549组比较,2、4、8、16和32 mg·L-1 吉西他滨作用后A549R组细胞抑制率降低(P<0.05),8 mg·L-1吉西他滨作用后细胞凋亡率降低(P<0.05).与A549组比较,A549R组细胞中有234个mRNAs表达水平升高,205个mRNAs表达水平降低,其中错配修复相关基因(MSH2和MSH6)、RAD50和MYC表达水平明显升高(P<0.05).KEGG信号通路富集分析,表达水平升高基因主要参与非同源末端连接、mRNA监测途径和DNA复制等信号通路.与A549组比较,A549R组细胞中MYC和γH2AX蛋白表达水平升高(P<0.05).ChIP法检测,RNA pol Ⅱ和γH2AX在MYC转录起始位点及exon 2上富集程度增加,MYC exon 2上存在G254A基因突变.与si-NC A549R组比较,si-MYC A549R组细胞中MYC mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),2、4、8、16和32 mg·L-1吉西他滨作用后si-MYC A549R组细胞抑制率升高(P<0.05),细胞凋亡率增加(