D-柠檬烯对胶质母细胞瘤细胞增殖的抑制作用及其机制

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 3; pp. 647 - 657
• Main Authors: 王腾飞, 陈凤, 齐玲, 雷婷, 宋美慧
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广州医科大学附属清远医院 广东省清远市人民医院,广东 清远 511500%广州医科大学附属清远医院 广东省清远市人民医院,广东 清远 511500%大理大学药学院,云南 大理 671000 28.05.2024; 大理大学药学院,云南 大理 671000
• Subjects: 细胞凋亡; D-limonene; 蛋白激酶B; Protein kinase B; 移植瘤; Glioblastoma; 胶质母细胞瘤; Transplantation tumor; D-柠檬烯; Apoptosis
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20240308

R739.4; 目的:探讨D-柠檬烯对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:将GBM细胞分为对照组(0 mmol·L-1 D-柠檬烯)和 0.2、0.4、0.6、0.8及1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组.采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,克隆形成法检测各组细胞克隆形成率,Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中蛋白激酶B(AKT)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶(PARP)蛋白表达水平,免疫荧光法检测各组细胞中裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase)-3 蛋白表达水平.15 只建立皮下移植瘤模型小鼠随机分为空白组(0 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯)、低剂量D-柠檬烯组(200 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯)和高剂量D-柠檬烯组(400 mg·kg-1·d-1 D-柠檬烯),每组5只.计算各组小鼠体内肿瘤抑制率,HE染色和免疫组织化学染色观察各组小鼠皮下肿瘤组织形态表现,并绘制肿瘤生长曲线,免疫组织化学法检测各组小鼠皮下瘤组织中Ki67蛋白阳性表达率,TUNEL染色法检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况.结果:对照组细胞呈长梭形,状态良好,紧密且贴壁生长,细胞器和细胞质正常;给药48 h后,0.6 mmol·L-1 D-柠檬烯组细胞体积减小,细胞膜虽完整但通透性增强,细胞质皱缩,细胞内部产生空泡结构,部分呈碎片状漂浮在溶液表面;0.8 和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组细胞中有明显凋亡小体生成,呈现凋亡状态.CCK-8法,与对照组比较,0.6、0.8 和 1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87、LN229 及GL261 细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.01),0.4 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87和GL261细胞增殖抑制率均明显升高(P<0.01).克隆形成法,与对照组比较,0.4、0.6和 0.8 mmol·L-1 D-柠檬烯组U87、LN229及GL261细胞克隆形成率均明显降低(P<0.05或P<0.01).Annexin Ⅴ-FITC/PI法,与对照组比较,D-柠檬烯处理48 h后,0.6、0.8和1.0 mmol·L-1 D-柠檬烯组LN229细胞凋亡率明显升高(P<0.01).Wes