APOE多态性在炎症因子诱导的神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用

R742; 目的:探讨载脂蛋白E(APOE)基因多态性在神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用,为阿尔茨海默病(AD)发病机制的研究提供理论依据.方法:体外分离培养APOE基因敲除小鼠(APOE-/-)原代皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴定细胞纯度.构建人APOE3和APOE4重组过表达质粒,分别转染至原代APOE-/-星形胶质细胞中,以APOE-/-原代细胞为对照,采用Western blotting法检测细胞中APOE和神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中APOE水平.采用白细胞介素 1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子(TNF)和...

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Published in吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 1; pp. 33 - 41
Main Authors 王岩, 李晓慧, 季瑶, 崔理立, 蔡玉洁
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广东医科大学附属医院 广东省衰老相关心脑疾病重点实验室,广东 湛江 524001 28.01.2024
Subjects
细胞凋亡
载脂蛋白E
基因多态性
Neurotoxicity
神经毒性
Apolipoprotein E
阿尔茨海默病
星形胶质细胞
Astrocyte
Alzheimer's disease
Gene polymorphism
Apoptosis
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ISSN1671-587X
DOI10.13481/j.1671-587X.20240105

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Summary:R742; 目的:探讨载脂蛋白E(APOE)基因多态性在神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用,为阿尔茨海默病(AD)发病机制的研究提供理论依据.方法:体外分离培养APOE基因敲除小鼠(APOE-/-)原代皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴定细胞纯度.构建人APOE3和APOE4重组过表达质粒,分别转染至原代APOE-/-星形胶质细胞中,以APOE-/-原代细胞为对照,采用Western blotting法检测细胞中APOE和神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中APOE水平.采用白细胞介素 1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子(TNF)和补体C1q联合刺激转染APOE3和转染APOE4 的原代星形胶质细胞制备炎症模型,分为APOE3+PBS组、APOE4+PBS组、APOE3+IL-1α+TNF+CC1q组和APOE4+IL-1α+ TNF+C1q组,采用细胞免疫荧光染色法观察各组细胞形态表现,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(Gpc4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(Gpc6)、血小板反应蛋白1(Thbs1)、血小板反应蛋白 2(Thbs2)、酸性分泌蛋白类似蛋白1(Sparcl1)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、C3和 S100钙结合蛋白B(S100B)mRNA表达水平,微球吞噬实验检测各组细胞吞噬能力,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Caspase-3)蛋白表达水平.结果:与APOE-/-组比较,转染APOE3 和APOE4 组细胞中APOE和GFAP蛋白表达水平及细胞培养上清中APOE水平明显升高(P<0.01).荧光显微镜下观察,分 别 与 APOE3+PBS 组 和 APOE4+PBS 组 比 较,APOE3+IL-1α +TNF+Cq1 组 和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组星形胶质细胞突起变短,胞体变大;与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1 组星形胶质细胞突起更短.分别与APOE3+PBS组和APOE4+ PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Gpc4、Gpc6、Thbs1、Thbs2和Sparcl
ISSN:1671-587X
DOI:10.13481/j.1671-587X.20240105