miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 49; no. 3; pp. 665 - 674
• Main Authors: 杨舟, 林书典, 詹宇威, 肖璐, 符克英, 黄小蝶
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 海南省人民医院 海南医学院附属海南医院风湿免疫科,海南 海口 570000 28.05.2023
• Subjects: 类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞; 微小RNA-93-5p; 细胞迁移; Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶; 细胞侵袭
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20230315

R593.22; 目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制.方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从 RA 患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞.将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒).采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组RA-FLSs迁移和侵袭数,Western blotting法检测各组细胞中ROCK2、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证 miR-93-5p与 ROCK2 之间的靶向关系.结果:免疫荧光法检测,Vimentin蛋白表达呈阳性.流式细胞术检测,第3代RA-FLSs表面CD55呈阳性表达,CD14和CD68呈阴性表达,证实分离的细胞为RA-FLSs.RT-qPCR法检测,与对照组比较,RA组患者滑膜组织中miR-93-5p表达水平明显降低(P<0.01),ROCK2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01).与空白组和mimics NC组比较,mimics组细胞中miR-93-5p表达水平明显升高(P<0.01),ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01).CCK-8法和EdU染色检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01);与mimic