沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 5; pp. 1305 - 1312
• Main Authors: 刘春静, 杨钰杰, 赵薇, 刘丽晶, 王娜
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 齐齐哈尔医学院附属第三医院妇一科,黑龙江 齐齐哈尔 161000 28.09.2024
• Subjects: 细胞周期; Cell proliferation; Wnt/β-连环蛋白信号通路; Endometrial cancer; Wnt/β-catenin signaling pathway; 子宫内膜癌; Cell cycle; 细胞分裂周期蛋白20; Cell division cycle protein 20; 细胞增殖
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20240514

R737.33; 目的:探讨细胞分裂周期蛋白20(CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制.方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质 T-HESC 细胞和人 EC 细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1 和 ECC-1 细胞)中 CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验.将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L-1 Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48 h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L-1 SM04690 干预 48 h).RT-qPCR法和 Western blotting法检测不同细胞中 CDC20 mRNA 和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平.结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05),其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高.与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P＜0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P＜0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).与sh-CDC20组比较,sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P＜0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P＜0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论:EC细胞中CDC20呈高表达,沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖.