草苁蓉多糖对THP-1巨噬细胞炎症反应的抑制作用及其机制

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 50; no. 6; pp. 1499 - 1511
• Main Authors: 马新月, 徐慧, 刁佳雯, 金爱花, 全吉淑
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 延边大学附属医院检验科,吉林 延吉 133000 28.11.2024; 延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林 延吉 133000%延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林 延吉 133000%延边大学附属医院检验科,吉林 延吉 133000
• Subjects: NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3; Pyroptosis; 草苁蓉多糖; 焦亡; 核因子κB; Mitogen-activated protein kinase; 丝裂原活化蛋白激酶; Nuclear factor-κB; NOD-like receptor family pyrin domain-containing protein 3; Boschnikia rossica polysaccharides
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20240603

R285.5; 目的:探讨草苁蓉多糖(BRPS)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1巨噬细胞炎症反应的影响,并阐明其作用机制.方法:将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,采用LPS诱导THP-1巨噬细胞,建立炎症模型.CCK-8法检测不同浓度(0、100、200、500、1 000和2 000 μg·L-1)LPS及不同浓度(0、12.5、25.0、50.0、100.0和 200.0 mg·L-1)BRPS处理后THP-1巨噬细胞存活率,选取后续实验药物浓度.将THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、低剂量BRPS组(25.0 mg·L-1 BRPS)、中剂量BRPS组(50.0 mg·L-1 BRPS)和高剂量BRPS组(100.0 mg·L-1 BRPS).采用P38 抑制剂SB203580、ERK抑制剂U0126、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和核因子κB(NF-κB)抑制剂BAY11-7082对THP-1细胞进行验证.另取THP-1细胞,分为对照组、LPS组、抑制剂组、100.0 mg·L-1 BRPS组和抑制剂+100.0 mg·L-1 BRPS组.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组THP-1巨噬细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测各组 THP-1 巨噬细胞中活性氧(ROS)水平,Hoechst33342/PI荧光染色法观察各组THP-1巨噬细胞膜损伤情况,JC-1荧光染色法观察各组THP-1巨噬细胞线粒体膜电位,蛋白印迹法检测各组THP-1巨噬细胞中环氧合酶2(COX-2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、消皮素D(GSDMD)-N、IL-1β、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NF-κB相关蛋白表达水平.结果:CCK-8法检测,LPS浓度为100～2 000 μg·L-1时,THP-1巨噬细胞存活率均>90%;与0 μg·L-1 LPS组比较,100、200、500、1 000和2 000 μg·L-1 LPS组THP-1巨噬细胞培养液中IL-6水平均明显升高(P<0.05),提示巨噬细胞炎症反应明显增强,因此选用100 μg·L-1 LPS构建炎症模型;12.5、25.0、