Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

• Published in: 吉林大学学报（医学版） Vol. 48; no. 5; pp. 1190 - 1199
• Main Authors: 陈为, 沈楠, 韩宛娜, 郗艳丽, 任旷, 金连海, 许娜
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 吉林医药学院生物医药双创转化实训平台,吉林 吉林 132013 01.09.2022; 吉林医药学院低压低氧环境与健康干预创新中心,吉林 吉林 132013%吉林医药学院低压低氧环境与健康干预创新中心,吉林 吉林 132013%吉林医药学院毒理学教研室,吉林 吉林 132013%吉林医药学院生物医药双创转化实训平台,吉林 吉林 132013
• Subjects: 诱导β干扰素的TIR结构域衔接蛋白; 巨噬细胞; Toll样受体4; 髓样分化因子88; 乳酸
• ISSN: 1671-587X
• DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220512

R392.12; 目的:探讨Toll样受体4(TLR4)接头分子髓样分化因子88(MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1(IL-1)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制.方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果.实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组.15 mmol·L-1乳酸诱导24 h后进行各指标检测.RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1)mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10(IL-10)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平.采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况.结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01).乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05).细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显.E