Necrostatin-1在高糖环境下促巨噬细胞氧化应激反应中的作用及机制

R781.4; 目的 探讨程序性细胞坏死特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在高糖环境下,促巨噬细胞氧化应激反应中的作用及分子机制.方法 将巨噬细胞在高糖组(25 mmol·L-1葡萄糖)与对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)中培养72 h后,采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFA-DA)探针、丙二醛及超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测其活性氧(ROS)含量、丙二醛及超氧化物歧化酶的活性;采用5μmol·L-1 Nec-1对高糖组进行干预,作为高糖联合Nec-1处理组,再次检测氧化应激指标,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白...

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Published in华西口腔医学杂志 Vol. 39; no. 6; pp. 675 - 681
Main Authors 周婷, 周雪, 宋斌
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 贵州省人民医院口腔科,贵阳550002 01.12.2021
Subjects
程序性细胞坏死抑制剂;糖尿病;牙周炎;氧化应激;受体相互作用蛋白-1
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Summary:R781.4; 目的 探讨程序性细胞坏死特异性抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)在高糖环境下,促巨噬细胞氧化应激反应中的作用及分子机制.方法 将巨噬细胞在高糖组(25 mmol·L-1葡萄糖)与对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)中培养72 h后,采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFA-DA)探针、丙二醛及超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒分别检测其活性氧(ROS)含量、丙二醛及超氧化物歧化酶的活性;采用5μmol·L-1 Nec-1对高糖组进行干预,作为高糖联合Nec-1处理组,再次检测氧化应激指标,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹法(WB)检测受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)的表达;沉默巨噬细胞中RIP1表达后,检测高糖环境对基因缺陷型细胞氧化应激反应的影响.结果 在高糖刺激下,细胞ROS含量及丙二醛活性显著高于对照组(P<0.0001),并且SOD活性显著低于对照组(P<0.0001);Nec-1干预后,高糖联合Nec-1处理组的ROS含量及丙二醛活性显著低于高糖组(P<0.0001),并且高糖联合Nec-1处理组的SOD活性显著高于高糖组(P<0.01).qRT-PCR及WB结果显示,高糖组中RIP1基因mRNA水平(P<0.001)及蛋白表达水平(P<0.0001)均显著高于对照组,高糖联合Nec-1处理组的RIP1基因表达及蛋白表达显著低于高糖组(P<0.0001);同时RIP1得到有效沉默后(P<0.001),高糖+RIP1干扰组的ROS含量及丙二醛活性显著低于高糖+干扰对照组(si-NC)(P<0.001),SOD活性较高糖+干扰对照组显著上升(P<0.0001).结论 高糖环境通过上调RIP1的表达诱发巨噬细胞的氧化应激反应.
ISSN:1000-1182
DOI:10.7518/hxkq.2021.06.008