新型PCV2衣壳融合蛋白在HEK293F细胞瞬时表达研究

Q81; 猪圆环病毒 2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)衣壳(Capsid)蛋白是制备抗猪圆环 2型病毒亚单位疫苗的有效免疫抗原,能在大肠杆菌及杆状病毒/昆虫细胞表达系统中获得表达,然而在哺乳细胞中的表达研究仍然缺乏.瞬时表达条件考察结果显示,采用宿主HEK293F细胞及PEI-40kDa转染试剂能获得 35%病毒PCV2 Capsid基因细胞转染效率.转染试剂PEI(Polyethylenimine)与DNA比例差异会影响复合物形成大小及形态,复合物形成15～80 nm颗粒有利于转染效率的提高.实验以免疫逃逸型猪圆环病毒 2b型NDSU41513病毒株,设计...

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Published in华东理工大学学报（自然科学版） Vol. 50; no. 1; pp. 62 - 70
Main Authors 罗清平, 彭妍, ALI Mohsin, 庄英萍, 郭美锦
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 上海国佳生化工程技术研究中心有限公司,上海 200237 01.02.2024
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237%上海国佳生化工程技术研究中心有限公司,上海 200237%华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237
Subjects
疫苗
transient expression
vaccine
瞬时表达
virus-like particle
猪圆环病毒2型
PCV2
类病毒颗粒
HEK293F
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Summary:Q81; 猪圆环病毒 2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)衣壳(Capsid)蛋白是制备抗猪圆环 2型病毒亚单位疫苗的有效免疫抗原,能在大肠杆菌及杆状病毒/昆虫细胞表达系统中获得表达,然而在哺乳细胞中的表达研究仍然缺乏.瞬时表达条件考察结果显示,采用宿主HEK293F细胞及PEI-40kDa转染试剂能获得 35%病毒PCV2 Capsid基因细胞转染效率.转染试剂PEI(Polyethylenimine)与DNA比例差异会影响复合物形成大小及形态,复合物形成15～80 nm颗粒有利于转染效率的提高.实验以免疫逃逸型猪圆环病毒 2b型NDSU41513病毒株,设计了新型PCV2 Capsid(△1-41aa)-Fc(pig)protein(PCFP)分子.在 3L反应器中成功实现了HEK293F细胞瞬时表达PCFP,表达水平达到 3.8 mg/L.PCFP蛋白能够自主装形成约为41 nm类病毒颗粒,诱导小鼠机体内产生强烈的体液免疫反应,具有很高的应用潜力.
ISSN:1006-3080
DOI:10.14135/j.cnki.1006-3080.20221112002