灰霉菌MyosinⅠ的体外表达纯化及抑制剂筛选

• Published in: 南京农业大学学报 Vol. 46; no. 3; pp. 482 - 488
• Main Authors: 宋国红, 刘松涛, 李林蔚, 刘飞, 张峰
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 南京农业大学植物保护学院,江苏 南京210095%江苏省中国科学院植物研究所,江苏 南京210014 2023
• Subjects: 纯化; 灰霉菌; 抑制剂筛选; Myosin; 表达
• ISSN: 1000-2030
• DOI: 10.7685/jnau.202204011

S482.2; [目的]本文旨在体外表达纯化灰霉菌Ⅰ型肌球蛋白(MyosinⅠ)及筛选抑制剂.[方法]采用SF9昆虫细胞蛋白表达系统表达灰霉菌MyosinⅠ(BcMyosinⅠ)马达结构域,用亲和层析和凝胶过滤层析纯化方法纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达情况.从实验室已有的化合物库中,用ATPase活性试剂盒测定化合物对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率.采用菌丝生长速率法测定部分化合物对灰霉菌的菌丝生长抑制活性.以禾谷镰刀菌Ⅰ型肌球蛋白(FgMyosinⅠ)三维结构为模板,同源模建预测BcMyosinⅠ三维结构.用AutoDock-Vina软件将部分化合物与BcMyosinⅠ进行分子对接.[结果]成功在体外表达纯化BcMyosinⅠ.20μmol?L-1条件下,化合物B1和B17对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率分别为56.24％和65.39％,显著高于对照药剂氰烯菌酯对酶活性的抑制率(27.29％);B1和B17对灰霉菌的菌丝生长抑制率分别为32.90％ 和83.44％,显著高于对照药剂氰烯菌酯对菌丝生长的抑制率(1.06％).对照药剂氰烯菌酯与BcMyosinⅠ的结合自由能为-29.26 kJ?mol-1,而化合物B1和B17与BcMyosinⅠ的结合自由能分别为-35.53和-36.78 kJ?mol-1,结合自由能低,说明化合物B1和B17对BcMyosinⅠ的抑制活性均高于氰烯菌酯.[结论]成功获得BcMyosinⅠ单体蛋白;筛选出B1和B17两个灰霉菌肌球蛋白抑制剂.