Kex2蛋白酶K291突变体性质和动力学研究

Q78; 利用毕赤酵母GS115表达系统,成功表达并纯化获得了两种Kex2蛋白酶突变体Kex2-K291L和Kex2-K291H.对比研究了天然Kex2蛋白酶和这两种突变体的酶学性质和稳定性.实验结果表明,与天然Kex2蛋白酶相比,Kex2-K291H和Kex2-K291L两种突变体的稳定性得到了明显的改善.两种突变体的最适pH和最适温度与天然Kex2蛋白酶保持一致,均为pH 9.0和37℃,两种突变体的温度稳定性也与天然Kex2蛋白酶基本一致.与天然Kex2蛋白酶相比,突变体Kex2-K291H的pH值稳定性范围从5.0～6.0扩大至5.0～7.0.蛋白酶促反应动力学研究表明,突变体Kex2...

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Published in华东理工大学学报（自然科学版） Vol. 47; no. 6; pp. 699 - 705
Main Authors 杨帆, 刘晓, 王之可, 李素霞
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海 200237%上海雅心生物技术有限公司,上海 200231 30.12.2021
Subjects
Kex2蛋白酶;突变体;毕赤酵母;稳定性;动力学
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ISSN1006-3080
DOI10.14135/j.cnki.1006-3080.20201009001

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Summary:Q78; 利用毕赤酵母GS115表达系统,成功表达并纯化获得了两种Kex2蛋白酶突变体Kex2-K291L和Kex2-K291H.对比研究了天然Kex2蛋白酶和这两种突变体的酶学性质和稳定性.实验结果表明,与天然Kex2蛋白酶相比,Kex2-K291H和Kex2-K291L两种突变体的稳定性得到了明显的改善.两种突变体的最适pH和最适温度与天然Kex2蛋白酶保持一致,均为pH 9.0和37℃,两种突变体的温度稳定性也与天然Kex2蛋白酶基本一致.与天然Kex2蛋白酶相比,突变体Kex2-K291H的pH值稳定性范围从5.0～6.0扩大至5.0～7.0.蛋白酶促反应动力学研究表明,突变体Kex2-K291H和Kex2-K291L的Kcat/Km值分别为天然Kex2蛋白酶的1.85倍和2.05倍.突变体Kex2-K291H和Kex2-K291L在改善天然Kex2蛋白酶自降解问题的同时,提高了pH稳定性和催化效率.
ISSN:1006-3080
DOI:10.14135/j.cnki.1006-3080.20201009001