金黄色葡萄球菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系的构建

R341%R378.11%R392-33; 目的 建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白.方法 利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列.金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况.最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果.结果 通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MO...

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Published in陆军军医大学学报 Vol. 46; no. 8; pp. 815 - 821
Main Authors 石姚佳, 田湉, 熊廷蓉, 王于, 张笑恺, 邹全明
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 475004 河南开封,河南大学药学院%400038 重庆,陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系微生物与生化药学教研室,国家免疫生物制品工程技术研究中心%050081 石家庄,陆军军医大学士官学校基础部 2024
Subjects
macrophages
secretory protein
金黄色葡萄球菌
巨噬细胞
胞内感染
分泌蛋白
intracellular infection
Staphylococcus aureus
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ISSN2097-0927
DOI10.16016/j.2097-0927.202311091

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Summary:R341%R378.11%R392-33; 目的 建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)巨噬细胞胞内感染状态下分泌蛋白高通量筛选体系,探索金葡菌胞内生存所需关键分泌蛋白.方法 利用课题组建立的金葡菌分泌蛋白真核系统表达载体库,通过DNA转染表达技术,得到能够在细胞内表达金葡菌分泌蛋白的RAW264.7巨噬细胞阵列.金葡菌感染RAW264.7后,清除胞外菌,观察金葡菌胞内生存情况.最后通过构建相应分泌蛋白的过表达及敲除金葡菌验证筛选结果.结果 通过探索RAW264.7质粒转染剂量、金葡菌感染复数(multiplicity of infection,MOI)以及感染时间,确立筛选体系的最优质粒转染剂量为1.0μg/孔、MOI为1.0、感染时间为4 h.筛选结果结合相应分泌蛋白过表达和敲除菌株验证,成功筛选出hypothetical protein、Serine protease E等分泌蛋白具有促进胞内金葡菌生存功能.结论 成功构建金葡菌巨噬细胞胞内生存关键分泌蛋白筛选体系.
ISSN:2097-0927
DOI:10.16016/j.2097-0927.202311091