Cas9融合RAD18因子提高HEK293T细胞的定点敲入效率

Q812%Q782; [目的]在哺乳动物细胞中,RAD51和RAD18是调节同源定向修复和非同源末端连接的关键因子.本研究目的在于探讨这2个因子在eSpCas9系统中对HEK293T细胞的定点敲入(Knock-in, KI)效率的影响,进而提高KI效率.[方法]通过构建eSpCas9-RAD51、eSpCas9-RAD18融合蛋白以及过表达RAD51、RAD18载体,比较它们的KI效率差异.[结果]eSpCas9-RAD18系统可以显著提高HEK293T细胞KI效率,约为原来eSpCas9系统的1.4～1.9倍(P＜0.01),而eSpCas9-RAD51系统和过表达RAD51/RAD18对K...

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Published in华南农业大学学报 Vol. 42; no. 5; pp. 8 - 18
Main Authors 黄广燕, 王豪强, 李国玲, 吴珍芳, 张献伟
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 温氏食品集团股份有限公司,广东 云浮 527400 01.09.2021
华南农业大学 动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心,广东 广州 510642%华南农业大学 动物科学学院/国家生猪种业工程技术研究中心,广东 广州 510642
Subjects
基因敲入
基因编辑
CRISPR/Cas9系统
RAD18
融合蛋白
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ISSN1001-411X
DOI10.7671/j.issn.1001-411X.202011028

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Summary:Q812%Q782; [目的]在哺乳动物细胞中,RAD51和RAD18是调节同源定向修复和非同源末端连接的关键因子.本研究目的在于探讨这2个因子在eSpCas9系统中对HEK293T细胞的定点敲入(Knock-in, KI)效率的影响,进而提高KI效率.[方法]通过构建eSpCas9-RAD51、eSpCas9-RAD18融合蛋白以及过表达RAD51、RAD18载体,比较它们的KI效率差异.[结果]eSpCas9-RAD18系统可以显著提高HEK293T细胞KI效率,约为原来eSpCas9系统的1.4～1.9倍(P＜0.01),而eSpCas9-RAD51系统和过表达RAD51/RAD18对KI效率无显著提高作用.[结论]本研究构建的eSpCas9-RAD18系统可以有效地提高HEK293T细胞的KI效率,可为基因编辑、基因治疗及定点转基因提供一种新的辅助整合工具.
ISSN:1001-411X
DOI:10.7671/j.issn.1001-411X.202011028