IL-21和CCL19修饰可提高NKP30 CAR-T细胞对肺癌的杀伤效率并促进其肿瘤浸润

• Published in: 南方医科大学学报 Vol. 44; no. 10; pp. 1926 - 1936
• Main Authors: 周智锋, 柳硕岩, 李洁羽, 陈明秋, 林辉, 陈宇杰, 陈伟杰, 林军鹏, 周航, 郑庆丰
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院 肿瘤免疫研究室,福建 福州 350014 01.10.2024; 福建省肿瘤转化医学重点实验室,福建 福州 350014%福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院 胸部外科,福建 福州 350014%福建医科大学肿瘤临床医学院//福建省肿瘤医院 胸部肿瘤放疗科,福建 福州 350014; 福建医科大学基础医学院,福建 福州 350100
• Subjects: lung cancer; chimeric antigen receptor gene modified-T lymphocytes; 肺癌; 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞; CCL19; interleukin-21; NKP30; IL-21
• ISSN: 1673-4254
• DOI: 10.12122/j.issn.1673-4254.2024.10.11

目的 探讨细胞因子IL-21和趋化因子CCL19修饰的NKP30 CAR-T细胞是否增强对肺癌的杀伤和浸润作用.方法 在NKP30 CAR基础上融合基因IL-21和CCL19构建IL-21-CCL19 NKP30 CAR;CAR-T细胞的培养使用CD3CD28单抗及细胞因子IL-2刺激;流式细胞术检测免疫细胞表型;迁移实验检测IL-21对免疫细胞的迁移作用;乳酸脱氢酶(LDH)及成球实验检测CAR-T细胞的杀伤及浸润能力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-γ的分泌数量;ELISA检测IL-21及CCL19的分泌情况;体内实验中,将肿瘤细胞显微注射到斑马鱼卵黄囊,构建斑马鱼移植瘤模型,24 h后将免疫细胞注射至同样部位,体式荧光显微镜拍摄荧光.结果 NKP30配体(B7H6)在正常组织及血液细胞不表达,在肺癌细胞上高表达(90%以上).IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞与NKP30 CAR-T细胞和常规T细胞相比,具有更强的增殖能力、迁移能力及中心记忆T细胞的形成(P<0.001),免疫抑制分子CTLA4与PD1显著降低(P<0.005),对肺癌细胞具有更强的杀伤能力(P<0.001),伴随IFN-γ数量明显增加(P<0.001).IL-21-CCL19 CAR-T 细胞杀伤肺癌细胞中产生大量细胞因子IL-21(3152.33±526.74 pg/mL)和趋化因子CCL19(1853±211.95 pg/mL).体内实验中,CAR-T细胞和普通T细胞比较,具有较强的杀伤能力和增殖能力,但2种CAR-T细胞无明显差异(P>0.05).结论 IL-21-CCL19 NKP30 CAR-T细胞更容易浸润到肿瘤内部,有效杀伤肿瘤细胞,同时产生更多的记忆T细胞.