巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析

• Published in: 华南农业大学学报 Vol. 41; no. 4; pp. 82 - 89
• Main Authors: 孔亚丽, 叶伟, 李赛妮, 朱牧孜, 钟国华, 章卫民
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 华南农业大学 农学院/ 农业农村部华南作物有害生物综合防治重点实验室/天然农药与化学生物学教育部重点实验室,广东 广州 510642 01.07.2020; 广东省科学院 广东省微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东 广州 510070%广东省科学院 广东省微生物研究所/华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东 广州,510070%华南农业大学 农学院/ 农业农村部华南作物有害生物综合防治重点实验室/天然农药与化学生物学教育部重点实验室,广东 广州,510642
• Subjects: 克隆; 巴戟天; 生物信息学; Cytospora rhizophorae; proL基因; 表达
• ISSN: 1001-411X
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201912016

Q936; [目的]从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础.[方法]利用PCR技术从C.rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能.[结果]克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33754.22,原子数为4696,等电点为5.69,为酸性蛋白.ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9％ 的ProL蛋白.生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40％,其三维结构模型中包含8个 α?螺旋和8个 β?折叠,保守氨基酸序列为207～216位.[结论]ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用.