甲壳类和贝类原肌球蛋白的广谱单克隆抗体制备与鉴定

TS254.1; 原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)被认为是甲壳类和贝类的主要过敏原,为了应对与日俱增的甲壳类和贝类过敏风险,以凡纳滨对虾的TM富集液为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得1株凡纳滨对虾过敏原TM的单克隆抗体细胞株2F8,并利用ELISA、Western blot、生物信息学等方法对2F8单抗进行免疫学特性分析,确定其效价、特异性、抗体亚型、结合区域,以TM的特异性单抗2F8和兔多抗构建双抗夹心胶体金试纸条分析单抗2F8的应用可行性.结果显示,单抗2F8的抗体亚型为IgG1型、效价为1.28×105,抗体与TM抗原的IC50值为20.21,亲和力高;...

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Bibliographic Details
Published in上海海洋大学学报 Vol. 33; no. 2; pp. 389 - 397
Main Authors 陆佳达, 栾宏伟, 闫艺方, 施文正, 卢瑛
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 上海海洋大学 食品学院,上海 201306 01.03.2024
上海海洋大学 农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,上海 201306
上海海洋大学 水产品加工及贮藏工程技术研究中心,上海 201306
Subjects
shellfish
tropomyosin
crustacean
甲壳类
原肌球蛋白
Litopenaeus vannamei
monoclonal antibody
凡纳滨对虾
单克隆抗体
贝类
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Summary:TS254.1; 原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)被认为是甲壳类和贝类的主要过敏原,为了应对与日俱增的甲壳类和贝类过敏风险,以凡纳滨对虾的TM富集液为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得1株凡纳滨对虾过敏原TM的单克隆抗体细胞株2F8,并利用ELISA、Western blot、生物信息学等方法对2F8单抗进行免疫学特性分析,确定其效价、特异性、抗体亚型、结合区域,以TM的特异性单抗2F8和兔多抗构建双抗夹心胶体金试纸条分析单抗2F8的应用可行性.结果显示,单抗2F8的抗体亚型为IgG1型、效价为1.28×105,抗体与TM抗原的IC50值为20.21,亲和力高;纯化的单抗2F8可以特异性识别甲壳类、贝类和鱿鱼的主要过敏原TM,存在3个潜在的TM抗原结合区域AA0-31,AA38-43和AA58-67.制备的试纸条检测结果显示,该试纸条可在10 min内目测5 ng/mL的凡纳滨对虾TM(相当于12.5 μg/kg),且可用于甲壳类和贝类肌肉中TM 的检测,研究表明所制备的2F8单抗亲和力高,可用于虾蟹贝和鱿鱼中的过敏原TM的鉴定与检测,具有较好的应用价值.本研究为过敏原TM的鉴定和检测提供了重要生物材料,也为今后TM的快速检测试剂盒开发提供了技术支持.
ISSN:1674-5566
DOI:10.12024/jsou.20230304124