一种新型的曲霉属洁净可逆性诱导表达系统

Q78; 构建了一种以构巢曲霉为表达宿主、过氧化氢(H2O2)抗性酶Peroxiredoxin(PRX)的编码基因AnPrxA的启动子PPRX为表达用启动子、H2O2 为表达诱导剂的新型、高效的曲霉表达体系.在双氧水诱导和非诱导条件下,评估PPRX的上游调控区介导绿色荧光蛋白(GFP)表达的特征.利用基因工程构建了 4个含不同长度启动子表达盒的克隆载体并转化至尿嘧啶生物合成缺陷型构巢曲霉宿主;分析了AnPrxA基因上游 2 033 bp序列中潜在的转录调控元件;利用荧光定量PCR测定表达盒拷贝数;考察与PPRX融合的GFP表达情况;并且探讨了双氧水诱导浓度和作用时间与蛋白表达量的关系.结果表明...

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Published in华东理工大学学报（自然科学版） Vol. 49; no. 4; pp. 536 - 545
Main Authors 李宝意, 周胜敏
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海200037 01.08.2023
Subjects
过氧化氢
表达调控
Aspergillus nidulans
expression regulation
PRX
蛋白表达
H2O2
protein expression
构巢曲霉
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Summary:Q78; 构建了一种以构巢曲霉为表达宿主、过氧化氢(H2O2)抗性酶Peroxiredoxin(PRX)的编码基因AnPrxA的启动子PPRX为表达用启动子、H2O2 为表达诱导剂的新型、高效的曲霉表达体系.在双氧水诱导和非诱导条件下,评估PPRX的上游调控区介导绿色荧光蛋白(GFP)表达的特征.利用基因工程构建了 4个含不同长度启动子表达盒的克隆载体并转化至尿嘧啶生物合成缺陷型构巢曲霉宿主;分析了AnPrxA基因上游 2 033 bp序列中潜在的转录调控元件;利用荧光定量PCR测定表达盒拷贝数;考察与PPRX融合的GFP表达情况;并且探讨了双氧水诱导浓度和作用时间与蛋白表达量的关系.结果表明,AnPrxA基因的 5'-非编码区 2 033 bp序列中至少包含9种基因表达调控元件,大都呈多拷贝排列;虽然该2033 bp的非编码区域对gfp的转录均有贡献,但是非编码区缩短至 500 bp也可以维持GFP蛋白的正常表达;在双氧水浓度为 0.5～2.0 mmol/L的诱导条件下,PPRX介导的GFP表达量提高 3倍,与先前鉴定的 2种曲霉属双氧水诱导型启动子的诱导率相似,但目标蛋白的绝对表达强度更高.研究还发现PPRX介导gfp转录水平在H2O2 诱导条件下提高 30倍,显著高于其蛋白表达的诱导率(3倍),因此今后进一步提升蛋白翻译效率将有望大幅提高目标蛋白的合成水平.
ISSN:1006-3080
DOI:10.14135/j.cnki.1006-3080.20220407001