腺相关病毒衣壳保守区多价抗原肽的原核表达及多克隆抗体制备

• Published in: 南方医科大学学报 Vol. 42; no. 6; pp. 944 - 948
• Main Authors: 李舒月, 曹春雨, 张浩, 李玉玲, 张雄洲, 杨子灿, 夏燕, 王磊, 吕亚丰
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室//三峡大学医学院,湖北 宜昌 443000%湖北民族大学附属民大医院风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室,湖北 恩施 445000 2022
• Subjects: 蛋白纯化; 多价抗原肽; 腺相关病毒; 多克隆抗体
• ISSN: 1673-4254
• DOI: 10.12122/j.issn.1673-4254.2022.06.20

目的 原核表达和纯化腺相关病毒(AAV)衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体.方法 设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定.将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组(1只/组),实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体,对照组注射PBS,ELISA检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果.结果 成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR,表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质;纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体,且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列.结论 诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体,为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础.