λ-Red重组技术结合复合诱变提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力

TQ922; 本研究旨在通过λ-Red重组技术结合复合诱变方法提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力.以E.coli NXA为出发菌株,首先采用λ-Red同源重组敲除编码支链氨基酸转运蛋白基因brnQ,获得突变菌株E.coli NXA1.然后将E.coli NXA1经常温常压等离子体(ARTP)、紫外(UV)与亚硝基胍(NTG)多轮复合诱变,以α-氨基丁酸(α-AB)为结构类似物进行筛选,筛选得到突变菌株E.coli NXA2.摇瓶发酵结果表明,在37 ℃、200r/min条件下发酵 40 h 后,E.coli NXA1 的 L-异亮氨酸滴度为 2.76 g/L,较 E.coli NXA 提高了 3...

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Published in食品工业科技 Vol. 46; no. 2; pp. 167 - 174
Main Authors 汪吉鹏, 朱滕滕, 刘璐, 马铖, 魏晓博, 刘慧燕, 方海田
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 宁夏大学食品科学与工程学院,宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室,宁夏银川 750021%宁夏三十六度生物科技有限公司,宁夏银川 750021 2025
Subjects
λ-Red recombinant technology
λ-Red重组技术
L-异亮氨酸
brnQ gene
复合诱变
brnQ基因
Escherichia coli
大肠杆菌
fermentation
complex mutagenesis
发酵
L-isoleucine
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2024020234

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Summary:TQ922; 本研究旨在通过λ-Red重组技术结合复合诱变方法提高大肠杆菌L-异亮氨酸合成能力.以E.coli NXA为出发菌株,首先采用λ-Red同源重组敲除编码支链氨基酸转运蛋白基因brnQ,获得突变菌株E.coli NXA1.然后将E.coli NXA1经常温常压等离子体(ARTP)、紫外(UV)与亚硝基胍(NTG)多轮复合诱变,以α-氨基丁酸(α-AB)为结构类似物进行筛选,筛选得到突变菌株E.coli NXA2.摇瓶发酵结果表明,在37 ℃、200r/min条件下发酵 40 h 后,E.coli NXA1 的 L-异亮氨酸滴度为 2.76 g/L,较 E.coli NXA 提高了 33.98％;E.coli NXA2 的 L-异亮氨酸滴度为 3.22 g/L,较E.coli NXA1 提高了 16.67％,较 E.coli NXA 提高了 56.31％.对菌株E.coli NXA2 经连续传代20代后,表现出较好的遗传稳定性.λ-Red重组技术结合复合诱变对大肠杆菌提高L-异亮氨酸合成能力有明显效果,为选育L-异亮氨酸高产菌株奠定理论基础.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2024020234