参照多重PCR片段分析法进行实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因测定结果读取方法的确定

• Published in: 四川精神卫生 Vol. 35; no. 2; pp. 137 - 143
• Main Authors: 张燕, 蒙卓成, 邢欢, 崔小花, 杨柳, 郑璇, 戴尊孝
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 西安市药学(精神卫生)重点实验室,陕西 西安 710100%西安市药学(精神卫生)重点实验室,陕西 西安 710100 2022; 西安市精神卫生中心,陕西 西安 710100
• Subjects: 实时荧光PCR法; ABCB1; 三等位基因; 多重PCR片段分析
• ISSN: 1007-3256
• DOI: 10.11886/scjsws20210908004

R749; 目的 为解决实时荧光PCR法对三等位基因测定结果无法正常读取的问题,通过参照多重PCR片段分析法,确定实时荧光PCR法读取方法,实现临床对ABCB1三等位基因准确、简便且价格低廉的检测.方法 收集西安市精神卫生中心2020年3月-2021年3月DNA样本2794例,抽取5％作为实验样本,分别进行实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法测定.根据PCR曲线Ct值的比较以及多重PCR片段分析法碱基峰位强度的比较,对比分析两种方法的判读结果,对其中报告结果不相同的样本进行数据核查并确定PCR读取方法.结果 共抽取139例样本,其中存在120例等位基因及19例三等位基因,实时荧光PCR法和多重PCR片段分析法对等位基因的检测结果完全一致.根据多重PCR片段分析结果,对19例三等位基因制定了实时荧光PCR法的读取方法:扩增曲线图中,当∣∣Ct.G-Ct.T∣-∣Ct.G-Ct.A∣∣<3,分别读取两组碱基Ct值小的碱基,将其组合形成判读结果;当∣∣Ct.G-Ct.T∣-∣Ct.G-Ct.A∣∣≥3,读取两组碱基Ct值最小的碱基,其纯合型即为判读结果.根据读取方法,修正实时荧光PCR法的测定结果为:1例G/G,1例A/A,4例T/G,5例T/A,8例T/T,与多重PCR片段分析法结果一致.结论 通过多重PCR片段分析法制定实时荧光PCR法对ABCB1三等位基因的读取方法,两者判读结果一致性良好.