转基因玉米NK603基体标准物质研制

转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,转基因标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证.目前,转基因玉米NK603已在我国批准进口用作加工原料,其安全监管亟须制备标准物质.本研究将筛选后的转基因玉米NK603杂合种子和对应的非转基因受体种子,按转基因质量分数为60.0 mg g–1、100.0 mg g–1、1000 mg g–1(理论值)的比例配置了3个梯度浓度水平的转基因基体标准物质.利用二重微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)对研制的标准物质进行均匀性与稳定性检测.结果...

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Published in作物学报 Vol. 48; no. 5; pp. 1059 - 1070
Main Authors 单露英, 李俊, 李亮, 张丽, 王颢潜, 高佳琪, 吴刚, 武玉花, 张秀杰
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 农业农村部科技发展中心,北京 100025%中国农业科学院油料作物研究所 / 农业农村部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,湖北武汉 430062%中国农业科学院生物技术研究所,北京 100081 12.05.2022
Subjects
转基因玉米NK603;基体标准物质;二重ddPCR方法;实时荧光PCR方法;联合定值
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Summary:转基因安全管理和标识制度的实施需要标准化的检测方法和转基因检测标准物质,转基因标准物质是获得准确、可靠、可比检测结果的保证.目前,转基因玉米NK603已在我国批准进口用作加工原料,其安全监管亟须制备标准物质.本研究将筛选后的转基因玉米NK603杂合种子和对应的非转基因受体种子,按转基因质量分数为60.0 mg g–1、100.0 mg g–1、1000 mg g–1(理论值)的比例配置了3个梯度浓度水平的转基因基体标准物质.利用二重微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)对研制的标准物质进行均匀性与稳定性检测.结果表明:研制的标准物质均匀性良好,可在60℃下运输14 d,稳定性不低于6个月.同时,由8家实验室采用二重ddPCR方法联合测定标准物质NK603转化体与内标基因的拷贝数比值,其标准值及不确定度为:(2.75±0.26)％、(4.68±0.39)％、(51.8±3.7)％.本批标物使用时最小取样量100 mg.可用于转基因食品和饲料中转基因成分NK603的定性和定量检测以及转基因玉米特异性检测方法的评价和实验室质量控制等领域.
ISSN:0496-3490
DOI:10.3724/SP.J.1006.2022.13025