结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白的表达和纯化及其诱导的免疫应答特征

• Published in: 中南大学学报（医学版） Vol. 46; no. 9; pp. 925 - 931
• Main Authors: 陈富超, 朱权, 余艳艳, 万康林, 罗奇志, 余平
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中南大学基础医学院免疫学系,长沙410078 28.09.2021; 遵义医科大学基础医学院免疫学教研室,贵州遵义563000%中南大学基础医学院免疫学系,长沙410078%湖南省胸科医院检验科,长沙410006%中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京102200
• Subjects: 结核分枝杆菌;Rv2654重组蛋白;细胞免疫;体液免疫;结核疫苗
• ISSN: 1672-7347
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2021.210318

目的:随着卡介苗的保护效应日趋减弱,以及结核分枝杆菌耐药株的广泛存在,全球尚缺乏控制结核病的有效疫苗,全球结核病发病率和病死率仍然较高.本研究旨在分析结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白在诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答中的作用,评价其作为抗结核病候选疫苗的潜力.方法:在细菌的对数生长期加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导细菌表达Rv2654重组蛋白,用亲和层析纯化,蛋白质印迹法鉴定Rv2654重组蛋白.采用ELISA方法检测不同人群血清与Rv2654重组蛋白的免疫反应性.以Rv2654重组蛋白免疫昆明小鼠,采用细胞因子磁珠阵列法检测小鼠外周血Th1/Th2类细胞因子水平,并以流式细胞术分析小鼠脾T、B淋巴细胞亚群分布.结果:成功表达Rv2654重组蛋白,以Rv2654重组蛋白作为抗原的ELISA结果显示其与卡介苗接种者或活动期结核患者血清均有反应性.Rv2654重组蛋白免疫小鼠可促进小鼠外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10等多种细胞因子表达(均P<0.05),流式细胞术结果显示Rv2654重组蛋白可显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞分化为效应T细胞,这种作用在联合卡介苗应用时更为明显,Rv2654重组蛋白也能刺激小鼠B细胞活化增殖并向记忆细胞分化.结论:Rv2654重组蛋白可诱导小鼠的细胞免疫应答,而且与卡介苗接种者和活动性肺结核患者血清有较好的结合能力,有望作为结核病免疫学预防和诊断类疫苗的候选抗原.