甲磺酸阿帕替尼调控Ras／Raf／MEK／ERK和JAK2／STAT3信号通路影响食管癌细胞增殖迁移凋亡和荷瘤鼠移植瘤生长的机制

• Published in: 中华肿瘤杂志 Vol. 41; no. 4; pp. 263 - 275
• Main Authors: 封悦, 周梦耘, 孙菲, 孔泽, 王坚, 孙志强, 胡莉钧, 汪建林, 华秋, 于静萍
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 上海交通大学医学院附属瑞金医院舟山分院放疗科316011%南京医科大学附属常州市第二人民医院放疗科213003 01.04.2019
• Subjects: Apatinib; Nude mice; [主题词] 食管肿瘤; 阿帕替尼; 裸鼠; [Subject words] Esophageal neoplasms; 凋亡; 血管内皮生长因子; Vascular endothelial growth factor; Apoptosis
• ISSN: 0253-3766
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2019.04.005

目的 探讨阿帕替尼对食管癌细胞生物学功能、食管癌裸鼠移植瘤生长情况的影响及其机制.方法 采用2.5、5、10、20、40 μmol／L阿帕替尼处理食管癌细胞KYSE?150和ECA?109,采用四甲基偶氮唑蓝法检测食管癌细胞的增殖活性,采用Transwell小室法检测食管癌细胞的迁移能力,采用克隆形成法检测食管癌细胞的克隆形成率,采用流式细胞术检测阿帕替尼对细胞周期和细胞凋亡的影响,采用实时荧光定量PCR法检测食管癌细胞中血管内皮细胞生长因子( VEGF) mRNA和VEGF受体2(VEGFR?2) mRNA的表达,采用酶联免疫吸附法检测食管癌细胞上清液中VEGF浓度,采用Western blot法检测正常培养条件下和 VEGF 刺激下食管癌细胞中 MEK、ERK、磷酸化 MEK (p?MEK)、磷酸化ERK (p?ERK)、JAK2、STAT3和磷酸化STAT3( p?STAT3)的表达.建立人食管鳞癌裸鼠移植瘤模型,采用随机数字表法随机分为健康对照组、250 mg阿帕替尼组和500 mg阿帕替尼组,计算肿瘤抑制率,采用免疫组化法检测移植瘤瘤组织中VEGF和VEGFR?2的表达.结果 20、40 μmol／L阿帕替尼处理细胞24 h后,KYSE?150细胞的迁移数分别为( 428.67± 4.16)个和( 286.67± 1.53)个, ECA?109细胞的迁移数分别为(1 123.67±70.00)个和(477.33±26.84)个,均低于空白对照组[分别为(874.67±22.75)个和(1 749.67±65.77)个],差异均有统计学意义(均P＜0.05). 10、20、40 μmol／L阿帕替尼处理细胞7 d后,KYSE?150细胞的克隆形成率分别为( 65.12± 25.48)%、(58.19± 24.73)%和(29.10±22.40)%,ECA?109细胞的克隆形成率分别为( 70.61± 15.14)%、( 61.12± 17.21)%和( 43.09± 11.13)%,均低于空白对照组( 100%),差异均有统计学意义(均 P＜0.05). KYSE?150 细胞中,20 μmol／L阿帕替尼组的G2／M期细胞比例和凋亡率分别为(26.27±3.30)%和( 15.65±1.54)%,空白对照组分别为(12.14±2.13)%和(3.49±0.74)%,差异均有统计学意义(均P＜0.05).