梨花药愈伤组织诱导和悬浮培养体系的建立及应用

• Published in: 果树学报 Vol. 40; no. 3; pp. 577 - 587
• Main Authors: 庄梦弟, 李涛, 辛骞祎, 周梦瑶, 张海霞, 马辉, 钱稷, 张玉星, 亓宝秀, 许建锋
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 英国利物浦约翰摩尔大学药学和分子生物学学院,英国利物浦 L33AF 2023; 河北省梨技术创新中心,河北保定 071001%河北农业大学园艺学院,河北保定 071001; 河北农业大学园艺学院,河北保定 071001%河北农业大学园艺学院,河北保定 071001
• Subjects: 梨; 细胞悬浮培养; 愈伤组织; 生长曲线
• ISSN: 1009-9980
• DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20220387

S661.2; [目的]建立梨悬浮细胞体系,并利用悬浮细胞体系获得高质量悬浮细胞,进行遗传转化和原生质体的分离.[方法]以新梨7号花药为试材,诱导获得梨花药愈伤组织,研究了细胞悬浮系建立和影响悬浮细胞增殖的主要因子.[结果]花药在1/2 MS+1.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-1 NAA+30 g·L-1蔗糖+7 g·L-1琼脂(pH值为5.8～6.0)培养基上诱导的愈伤组织,经4～5次继代得到了黄白色、颗粒状,状态相对较好的愈伤组织;将愈伤组织接种于液体培养基中,于28℃,200 r·min-1的黑暗条件下悬浮振荡培养,经4～5次悬浮继代培养建立了悬浮细胞系,适宜的启动和增殖培养基为:MS+1.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+30 g·L-1蔗糖,细胞生长曲线呈"S"型,活细胞率达81.98％,近圆细胞率达83.66％,可作为遗传转化的受体,转化率为20.00％.也可直接用于原生质体的分离,原生质体产量达3.67×106 个·mL-1,活力可达92.00％.[结论]建立了梨悬浮细胞培养体系,利用所建体系获得了高质量的悬浮细胞,可直接用于遗传转化和原生质体的分离.