多子小瓜虫PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

S941.5; 为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体CO Ⅰ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法.结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法.其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μ...

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Published in水产学报 Vol. 48; no. 10; pp. 161 - 168
Main Authors 曹泽艺, 周庆杰, 陈凯, 习丙文, 谢骏, 潘良坤, 毛颖
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 南京农业大学无锡渔业学院,江苏无锡 214081 2024
中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业农村部稻渔综合种养生态重点实验室,江苏无锡 214081%中国水产科学研究院淡水渔业研究中心,农业农村部稻渔综合种养生态重点实验室,江苏无锡 214081%宜兴市水产畜牧站,江苏宜兴 214252
Subjects
Ichthyophthirius multifiliis
检测方法
荧光定量PCR
小瓜虫病
ichthyophthiriasis
detec-tion assay
多子小瓜虫
PCR
real-time fluorescence quantitative PCR
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ISSN1000-0615
DOI10.11964/jfc.20220813641

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Summary:S941.5; 为克服现有小瓜虫病的显微镜检和PCR诊断等方法在该寄生虫的感染早期阶段和环境样本检测中存在的缺陷,建立特异性强、灵敏度高的多子小瓜虫PCR检测方法,实验根据多子小瓜虫线粒体CO Ⅰ序列设计和筛选了一对引物,经过PCR程序优化、特异性、灵敏性验证以及临床和环境样品检测分析,分别建立了普通PCR和荧光定量PCR检测方法.结果显示,本研究获得的检测引物对多子小瓜虫有较高的扩增特异性,对同属纤毛虫类的草履虫、四膜虫和肠袋虫以及常见养殖鱼类宿主异育银鲫、草鱼、尼罗罗非鱼和团头鲂等样本均无扩增;扩增特异性和灵敏度都优于文献报道的方法.其中,普通PCR最低检测的样本浓度为掠食体2.67个/μL,荧光定量PCR在掠食体0.02个/μL时依然能有效检出,荧光定量PCR检测灵敏度高于普通PCR.研究表明,在临床样本和养殖水环境样本检测应用中,基于该引物的两种PCR方法表现出很高的一致性,能有效检出潜伏感染鱼体和养殖水环境中的多子小瓜虫.本研究所建立的多子小瓜虫的检测方法特异性强、灵敏度高,适用于淡水养殖中小瓜虫病的早期诊断和病原体的检测.
ISSN:1000-0615
DOI:10.11964/jfc.20220813641