农杆菌介导的厚皮甜瓜遗传转化体系的建立

S652; [目的]遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑.[方法]以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体pQY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系.[结果]以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6％;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L-1的Basta较适宜筛选抗性植株.利...

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Published in果树学报 Vol. 41; no. 3; pp. 533 - 542
Main Authors 唐伶俐, 徐龙兰, 徐永阳, 贺玉花, 田小琴, 张健, 孔维虎, 李文东, 赵光伟
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国农业科学院郑州果树研究所,郑州 450009 2024
三亚中国农业科学院国家南繁研究院,海南三亚 572000%中国农业科学院郑州果树研究所,郑州 450009%潍坊创科种苗有限公司,山东昌乐 262400
Subjects
Muskmelon
Genetic transformation
Seedling age
Resistant bud selec-tion
遗传转化
抗性芽筛选
Infection pathway
厚皮甜瓜
侵染方式
苗龄
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ISSN1009-9980
DOI10.13925/j.cnki.gsxb.20230399

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Summary:S652; [目的]遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑.[方法]以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体pQY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系.[结果]以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6％;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L-1的Basta较适宜筛选抗性植株.利用以上方法,单次转化120个子叶节外植体,可获得31个再生荧光芽,17株生根苗,通过PCR检测确定8株阳性苗,阳性率达58.8％,阳性植株获得率为6.7％.[结论]成功建立了以B8为材料的甜瓜高效遗传转化体系,为甜瓜关键基因功能验证和种质精准改良提供技术支持.
ISSN:1009-9980
DOI:10.13925/j.cnki.gsxb.20230399