拟穴青蟹精氨酸激酶的重组表达及致敏性分析

Q789; 为比较拟穴青蟹(Scylla paramamosain)重组精氨酸激酶(recombinant arginine kinase,rAK)和天然AK(native AK,nAK)的致敏性,并鉴定AK分子中的致敏优势区域,首先基于AK的抗原表位分布与空间结构,将AK分子分为AK-E1(氨基酸(amino acids,AA)1～92)、AK-E2(AA 87～187)、AK-E3(AA 172～265)和AK-E4(AA 276～357)4 个片段,采用大肠杆菌原核表达系统对其进行分段表达,并分别分离纯化nAK、rAK及AK的4 个分段表达产物.用BALB/c小鼠模型评价重组蛋白的致敏性...

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Published in食品科学 Vol. 45; no. 7; pp. 19 - 27
Main Authors 杨阳, 何欣蓉, 何少贵, 陈锦莉, 刘萌, 费丹霞, 毛海燕, 刘光明
Format Magazine Article
LanguageChinese
Published 集美大学海洋食品与生物工程学院,福建 厦门 361021%集美大学海洋食品与生物工程学院,福建 厦门 361021%翔安创新实验室,福建 厦门 361104%厦门华厦学院环境与公共健康学院,福建 厦门 361024%厦门海洋职业技术学院海洋生物学院,福建 厦门 361102 15.04.2024
厦门华厦学院环境与公共健康学院,福建 厦门 361024
Subjects
BALB/c mice
精氨酸激酶
Scylla paramamosain
recombinant protein
致敏性
arginine kinase
重组蛋白
拟穴青蟹
BALB/c小鼠
allergenicity
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ISSN1002-6630
DOI10.7506/spkx1002-6630-20230818-130

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Summary:Q789; 为比较拟穴青蟹(Scylla paramamosain)重组精氨酸激酶(recombinant arginine kinase,rAK)和天然AK(native AK,nAK)的致敏性,并鉴定AK分子中的致敏优势区域,首先基于AK的抗原表位分布与空间结构,将AK分子分为AK-E1(氨基酸(amino acids,AA)1～92)、AK-E2(AA 87～187)、AK-E3(AA 172～265)和AK-E4(AA 276～357)4 个片段,采用大肠杆菌原核表达系统对其进行分段表达,并分别分离纯化nAK、rAK及AK的4 个分段表达产物.用BALB/c小鼠模型评价重组蛋白的致敏性,结果显示,rAK致敏小鼠血清中特异性抗体水平、脾脏淋巴细胞的Th2型细胞因子释放水平均显著升高,表明rAK可使机体致敏,但其免疫原性较nAK弱;AK的4个分段表达产物中AK-E2的免疫原性最强.同时,rAK能够刺激RBL-2H3细胞释放β-己糖苷酶,但rAK对效应细胞的刺激作用低于nAK;4个分段表达产物中AK-E2和AK-E4对效应细胞的刺激作用较强.综上,通过原核表达系统获得的rAK免疫原性较nAK弱,而AK分子中免疫原性较强的区域为AA 87～187,免疫反应性较强的区域为AA 276～357.
ISSN:1002-6630
DOI:10.7506/spkx1002-6630-20230818-130