HBV DNA聚合酶在介导HBV相关肝细胞癌肿瘤细胞免疫逃逸中的作用

• Published in: Linchuang gandanbing zazhi Vol. 39; no. 12; pp. 2858 - 2866
• Main Authors: 李鸿侠, 孙一萌, 张鸿涛, 韩树旺, 张德林, 尚海涛, 郭午, 刘军舰, 李忠廉
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: Changchun Journal of Clinical Hepatology 01.12.2023; 天津市中西医结合医院肝胆胰外科,天津 300100%天津医科大学研究生院,天津 300070
• Subjects: Cell growth; Cytokines; DNA polymerase; Liver cancer; Protein expression; Proteins; Transcription factors; Carcinoma,Hepatocellular; 细胞黏附分子; Tumor Escape; 指导DNA的DNA聚合酶; Cell Adhesion Molecules; 肿瘤逃逸; DNA-Directed DNA Polymerase; 癌,肝细胞
• ISSN: 1001-5256; 2097-3497
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.12.017

目的 本研究旨在明确HBV DNA聚合酶是否与T淋巴细胞功能衰竭相关，进而介导HBV相关肝细胞癌 (HCC) 肿瘤细胞的免疫逃逸以及探寻具体的分子机制。 方法 稳定转染带有Flag标签的HBV DNA聚合酶表达质粒 (Flag-HBV-P) 和细胞间黏附分子-1 (ICAM1) 的肝癌细胞系Huh7、HepG2与Jurkat细胞共培养，MTT、qRT-PCR、酶联免疫吸附测定 (ELISA) 实验分别检测Jurkat细胞增殖、活化 (CD69表达) 以及细胞因子IFN-γ分泌情况。RNA-seq筛选稳转细胞系与对照细胞中表达差异的免疫相关分子，mRNA半衰期及蛋白半衰期实验确定HBV DNA聚合酶对免疫相关分子具体在何种水平产生影响。网站预测此免疫相关分子启动子区域可能结合的转录因子，Western Blot实验验证转录因子对免疫相关分子的影响，挽救实验确定HBV DNA聚合酶是否通过此转录因子影响免疫相关分子的表达水平。两组间比较采用成组t检验。 结果 与对照组相比，实验组细胞 (Huh7、HepG2) 增殖、活化及细胞因子分泌明显降低 (P值均<0.01) 。与对照细胞相比，实验组细胞 (Huh7、HepG2) 的ICAM1 mRNA和蛋白水平均降低 (P值均<0.01) 。网站预测ICAM1启动子并初步筛选锚定了NFKB1、RELA和STAT3。与对照组相比，实验组细胞 (Huh7、HepG2) p65蛋白的表达水平明显降低 (P值均<0.01) 。过表达p65后，ICAM1蛋白表达水平明显升高，降表达p65后，ICAM1蛋白表达水平明显降低 (P值均<0.01) ，挽救实验中过表达p65后，对照组与实验组细胞的ICAM1表达水平无明显差异 (P值均>0.05) 。过表达ICAM1后，对照组与实验组细胞 (Huh7、HepG2) 的增殖、活化及细胞因子分泌无明显差异 (P值均>0.05) 。 结论 HBV DNA聚合酶通过抑制NF-κB中p65的表达来下调ICAM1的水平以介导HCC免疫逃逸。