DNAハイブリダイゼーション法によるStreptococcus salivariusの特異的検出
Streptococcus salivariusのデキストラナーゼ遺伝子 (dex遺伝子) をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法により, 本菌の特異的検出・同定を試みた.DNAプローブにはジゴキシゲニン標識したdex断片を使用した.このプローブを口腔レンサ球菌の標準菌株 (14種25株) のゲノムDNAに対してハイブリダイズした結果, S. salivariusのみが特異的に検出され, その他の菌株は全くハイブリットを形成しなかった.また, S. salivarius精製ゲノムDNAに対するdex DNAプローブの検出感度を測定したところ1ngのゲノムDNAを検出することが可能であっ...
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Published in | 昭和歯学会雑誌 Vol. 20; no. 2; pp. 192 - 197 |
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Main Authors | , , , , , |
Format | Journal Article |
Language | Japanese |
Published |
昭和大学・昭和歯学会
2000
|
Online Access | Get full text |
ISSN | 0285-922X 2186-5396 |
DOI | 10.11516/dentalmedres1981.20.192 |
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Abstract | Streptococcus salivariusのデキストラナーゼ遺伝子 (dex遺伝子) をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法により, 本菌の特異的検出・同定を試みた.DNAプローブにはジゴキシゲニン標識したdex断片を使用した.このプローブを口腔レンサ球菌の標準菌株 (14種25株) のゲノムDNAに対してハイブリダイズした結果, S. salivariusのみが特異的に検出され, その他の菌株は全くハイブリットを形成しなかった.また, S. salivarius精製ゲノムDNAに対するdex DNAプローブの検出感度を測定したところ1ngのゲノムDNAを検出することが可能であった.さらに口腔内から分離したS. salivarius 100株に対してこの検出方法の信頼性を評価したところ, このプローブは使用したすべての分離株に対して明瞭なハイブリットを形成した.これらの結果は, S. salivariusのデキストラナーゼ遺伝子をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法は, 本菌種の特異的検出・同定に有用であることを示唆している. |
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AbstractList | Streptococcus salivariusのデキストラナーゼ遺伝子(dex遺伝子)をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法により, 本菌の特異的検出・同定を試みた. DNAプローブにはジゴキシゲニン標識したdex断片を使用した. このプローブを口腔レンサ球菌の標準菌株(14種25株)のゲノムDNAに対してハイブリダイズした結果, S. salivariusのみが特異的に検出され, その他の菌株は全くハイブリットを形成しなかった. また, S. salivarius精製ゲノムDNAに対するdex DNAプローブの検出感度を測定したところ1ngのゲノムDNAを検出することが可能であった. さらに口腔内から分離したS. salivarius100株に対してこの検出方法の信頼性を評価したところ, このプローブは使用したすべての分離株に対して明瞭なハイブリットを形成した. これらの結果は, S. salivariusのデキストラナーゼ遺伝子をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法は, 本菌種の特異的検出・同定に有用であることを示唆している. Streptococcus salivariusのデキストラナーゼ遺伝子 (dex遺伝子) をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法により, 本菌の特異的検出・同定を試みた.DNAプローブにはジゴキシゲニン標識したdex断片を使用した.このプローブを口腔レンサ球菌の標準菌株 (14種25株) のゲノムDNAに対してハイブリダイズした結果, S. salivariusのみが特異的に検出され, その他の菌株は全くハイブリットを形成しなかった.また, S. salivarius精製ゲノムDNAに対するdex DNAプローブの検出感度を測定したところ1ngのゲノムDNAを検出することが可能であった.さらに口腔内から分離したS. salivarius 100株に対してこの検出方法の信頼性を評価したところ, このプローブは使用したすべての分離株に対して明瞭なハイブリットを形成した.これらの結果は, S. salivariusのデキストラナーゼ遺伝子をプローブとしたDNAハイブリダイゼーション法は, 本菌種の特異的検出・同定に有用であることを示唆している. |
Author | 山本, 綾子 後藤, 延一 五十嵐, 武 伊田, 博 佐々, 龍二 矢野, 雄一郎 |
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References | 4) Russell RRB : Genetic analysis and genetic probes for oral bacteria. In : Ferguson DB (ed) : Aspects of Oral Molecular Biology, Basel, 1991, Karger, pp 57-75 8) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Sequence analysis of the Streptococcus mutans Ingbritt dexA gene encoding extracellular dextranase. Microbiol Immunol, 39 : 853-860, 1995 15) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Direct detection of Streptococcus mutans in human dental plaque by polymerase chain reaction. Oral Microbiol Immunol, 11 : 294-298, 1996 10) Ida H, Igarashi T, Goto N, Sasa R : Identification of Streptococcus mutans by dexA DNA probe. Pediatr Dent J, 8 : 1-5, 1998 11) Ida H, Igarashi T, Yamamoto A, Goto N, Sasa R : A DNA probe specific to Streptococcus sobrinus. Oral Microbiol Immunol, 14 : 233-237, 1999 9) Wanda S-Y, Curtiss R III : Purification and characterization of Streptococcus sobrinus dextranase produced in recombinant Escherichia coli and sequence analysis of the dextranase gene. J Bacteriol, 176 : 3839-3850, 1994 3) Hamada S, Slade HD : Biology, immunology, and cariogenicity of Streptococcus mutans. Microbiol Rev, 44 : 331-384, 1980 12) Ohnishi Y, Kubo S, Ono Y, Nozaki M, Gonda Y, Okano H, Matsuya T, Matsushiro A, Morita T : Cloning and sequencing of the gene coding for dextranase from Streptococcus salivarius. Gene, 156 : 93-96, 1995 1) Gold OG, Jordan HV, van Houte J : A selective medium for Streptococcus mutans. Arch Oral Biol, 18 : 1357-1364, 1973 6) Smorawinska M, Kuramitsu HK : DNA probe for detection of cariogenic Streptococcus mutans. Oral Microbiol Immunol, 7 : 177-181, 1992 14) Ida H, Igarashi T, Yamamoto A, Yano Y, Sasa R, Goto N : Extraction of chromosomal DNA from cariogenic bacteria using benzyl chloride. Pediatr Dent J, 2000, 投稿中 2) Beighton D, Russell RRB, Whiley RA : A simple biochemical scheme for the differentiation of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus. Caries Res, 25 : 174-178, 1991 7) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Characterization of the dextranase purified from Streptococcus mutans Ingbritt. Microbiol Immunol, 36 : 969-976, 1992 13) Lawman P, Bleiweis AS : Molecular cloning of the extracellular endodextranase of Streptococcus salivarius. J Bacteriol, 173 : 7423-7428, 1991 5) Colby SM, Harrington DJ, Russell RRB : Identification and genetic characterization of melibiose-negative isolates of Streptococcus mutans. Caries Res, 29 : 407-412, 1995 |
References_xml | – reference: 10) Ida H, Igarashi T, Goto N, Sasa R : Identification of Streptococcus mutans by dexA DNA probe. Pediatr Dent J, 8 : 1-5, 1998 – reference: 2) Beighton D, Russell RRB, Whiley RA : A simple biochemical scheme for the differentiation of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus. Caries Res, 25 : 174-178, 1991 – reference: 13) Lawman P, Bleiweis AS : Molecular cloning of the extracellular endodextranase of Streptococcus salivarius. J Bacteriol, 173 : 7423-7428, 1991 – reference: 14) Ida H, Igarashi T, Yamamoto A, Yano Y, Sasa R, Goto N : Extraction of chromosomal DNA from cariogenic bacteria using benzyl chloride. Pediatr Dent J, 2000, 投稿中 – reference: 4) Russell RRB : Genetic analysis and genetic probes for oral bacteria. In : Ferguson DB (ed) : Aspects of Oral Molecular Biology, Basel, 1991, Karger, pp 57-75 – reference: 5) Colby SM, Harrington DJ, Russell RRB : Identification and genetic characterization of melibiose-negative isolates of Streptococcus mutans. Caries Res, 29 : 407-412, 1995 – reference: 8) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Sequence analysis of the Streptococcus mutans Ingbritt dexA gene encoding extracellular dextranase. Microbiol Immunol, 39 : 853-860, 1995 – reference: 1) Gold OG, Jordan HV, van Houte J : A selective medium for Streptococcus mutans. Arch Oral Biol, 18 : 1357-1364, 1973 – reference: 6) Smorawinska M, Kuramitsu HK : DNA probe for detection of cariogenic Streptococcus mutans. Oral Microbiol Immunol, 7 : 177-181, 1992 – reference: 11) Ida H, Igarashi T, Yamamoto A, Goto N, Sasa R : A DNA probe specific to Streptococcus sobrinus. Oral Microbiol Immunol, 14 : 233-237, 1999 – reference: 12) Ohnishi Y, Kubo S, Ono Y, Nozaki M, Gonda Y, Okano H, Matsuya T, Matsushiro A, Morita T : Cloning and sequencing of the gene coding for dextranase from Streptococcus salivarius. Gene, 156 : 93-96, 1995 – reference: 15) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Direct detection of Streptococcus mutans in human dental plaque by polymerase chain reaction. Oral Microbiol Immunol, 11 : 294-298, 1996 – reference: 9) Wanda S-Y, Curtiss R III : Purification and characterization of Streptococcus sobrinus dextranase produced in recombinant Escherichia coli and sequence analysis of the dextranase gene. J Bacteriol, 176 : 3839-3850, 1994 – reference: 7) Igarashi T, Yamamoto A, Goto N : Characterization of the dextranase purified from Streptococcus mutans Ingbritt. Microbiol Immunol, 36 : 969-976, 1992 – reference: 3) Hamada S, Slade HD : Biology, immunology, and cariogenicity of Streptococcus mutans. Microbiol Rev, 44 : 331-384, 1980 |
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