Cell-based assay を用いた抗アクアポリン４抗体定量の試み

• Published in: 天理医学紀要 Vol. 20; no. 2; p. 106
• Main Author: 景山, 卓
• Format: Journal Article
• Language: Japanese
• Published: 公益財団法人 天理よろづ相談所 医学研究所 25.12.2017; 天理よろづ相談所医学研究所
• ISSN: 1344-1817; 2187-2244
• DOI: 10.12936/tenrikiyo.20-014

抗アクアポリン4抗体 (抗AQP4抗体) は，中枢神経の自己免疫性疾患である視神経脊髄炎関連疾患 (neuromyelitis optica spectrum disorders; NMOSD) の疾患特異マーカーとして2004年に発見された．我々は 2008年よりHEK293細胞を用いた抗AQP4抗体のcell-based assay(CBA) を開始し，臨床における診断ツー ルとして利用するとともに，病勢や治療効果に伴う抗体価の変化の検討を続けている． CBAはリコンビナントの抗原蛋白を培養細胞上に発現させ，それを基質として抗原抗体反応を起こさせる手法である．この方法では抗原蛋白が生体内に近い立体構造を有するため，ウェスタンブロットやenzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) に比べて，より高い感度・特異度が期待される．しかしながら， 一方でアッセイ毎に蛋白を発現させるため，抗原の発現量が細胞密度，viabilityや抗原蛋白遺伝子導入効率などに左右されやすい．また，抗体の結合は蛍光顕微鏡下での視認により判定するため，染色状態に影響される他，検者によるバイアスも受けやすい． 一方，2013年よりELISAによる抗AQP4抗体測定が保険収載された．ELISAでは一定量の抗原蛋白を反応用プレート内に固定して反応させるため，定量性やアッセイ毎の再現性においてはCBAよりも安定した結果が期待されるが，感度と特異度はCBAのそれを下回っている．また，抗体量が多くなると検出範囲を超えてしまい，検体を稀釈して再検するなどの処置が必要となる．現時点では，ELISA法は診断目的にのみ保険適用されており，抗体価の経時的測定は実費負担となる． 今回我々は，当院に入院した4人のNMOSD患者について，血清抗AQP4抗体の経時変化をCBAおよびELISAの両者で計測し，比較検討を行った．本研究では，個々の症例においては，CBAと ELISAによる抗体価に相関がみられた．一方，CBAにより同抗体価を示した症例間の比較では，ELISAによる抗体価に差がみられた．臨床経過と抗体価の推移の比較では，全例において発症直後の急性期治療後に血清抗AQP4抗体の低下がみられ，その後，経口プレドニゾロンとシクロスポリンによる再発予防療法により，血清抗AQP4抗体の低下が3年以上にわたり維持された． 以上の結果から， 各症例において，CBAによる抗AQP4抗体価の経時的評価の有用性が示された．