パラフィン包埋組織切片上でのMicroProbe Systemを用いたin situ hybridization法によるコニディオボルス症起因菌，ムーコル症起因菌およびアスペルギルス症起因菌の18S rRNAの特異的検出法
侵襲性コニディオボルス症は致死率の高い新興真菌症として注目されている．ホルマリン固定パラフィン（FFPE）組織切片上でコニディオボルス症起因菌（Conidiobolus sp.）をムーコル症起因菌（Rhizopus microsporus）およびアスペルギルス症起因菌（Aspergillus fumigatus）から判別する手法の確立を目的とし，各症例のFFPE組織切片を用いて18S rRNAを標的としたin situ hybridization（ISH）法について検討した．18S rRNAの中でも特に変異に富んだV4領域の可変領域に着目し，Conidiobolus sp. , R. micr...
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| Published in | 日本医真菌学会雑誌 Vol. 60; no. 4; pp. 77 - 84 |
|---|---|
| Main Authors | , , , , , , , |
| Format | Journal Article |
| Language | Japanese |
| Published |
一般社団法人 日本医真菌学会
2019
|
| Subjects | |
| Online Access | Get full text |
| ISSN | 2434-5229 2434-5237 |
| DOI | 10.11534/ishinkin.19-00007 |
Cover
| Abstract | 侵襲性コニディオボルス症は致死率の高い新興真菌症として注目されている．ホルマリン固定パラフィン（FFPE）組織切片上でコニディオボルス症起因菌（Conidiobolus sp.）をムーコル症起因菌（Rhizopus microsporus）およびアスペルギルス症起因菌（Aspergillus fumigatus）から判別する手法の確立を目的とし，各症例のFFPE組織切片を用いて18S rRNAを標的としたin situ hybridization（ISH）法について検討した．18S rRNAの中でも特に変異に富んだV4領域の可変領域に着目し，Conidiobolus sp. , R. microsporus およびA. fumigatus のそれぞれの培養株についてコンセンサスプライマーを用いて相互に塩基数および配列位置の異なる3つずつのアンチセンスプローブ（プローブA，BおよびC）を作製し，ISHを行った．その結果，相互に相同性が60%以下となるそれぞれのプローブC（Conidiobolus sp.189 b，R. microsporus 155 bおよびA. fumigatus 154 b）を用い，ストリンジェンシーの条件を最適化することによりコニディオボルス症起因菌（Conidiobolus sp.），ムーコル症起因菌（R. microsporus）およびアスペルギルス症起因菌（A. fumigatus）を高感度に判別することができた．これらの起因菌をFFPE組織切片上で迅速かつ確実に検出，同定することが可能となり，真菌症治療戦略に大きく寄与することが期待される． |
|---|---|
| AbstractList | 侵襲性コニディオボルス症は致死率の高い新興真菌症として注目されている．ホルマリン固定パラフィン（FFPE）組織切片上でコニディオボルス症起因菌（Conidiobolus sp.）をムーコル症起因菌（Rhizopus microsporus）およびアスペルギルス症起因菌（Aspergillus fumigatus）から判別する手法の確立を目的とし，各症例のFFPE組織切片を用いて18S rRNAを標的としたin situ hybridization（ISH）法について検討した．18S rRNAの中でも特に変異に富んだV4領域の可変領域に着目し，Conidiobolus sp. , R. microsporus およびA. fumigatus のそれぞれの培養株についてコンセンサスプライマーを用いて相互に塩基数および配列位置の異なる3つずつのアンチセンスプローブ（プローブA，BおよびC）を作製し，ISHを行った．その結果，相互に相同性が60%以下となるそれぞれのプローブC（Conidiobolus sp.189 b，R. microsporus 155 bおよびA. fumigatus 154 b）を用い，ストリンジェンシーの条件を最適化することによりコニディオボルス症起因菌（Conidiobolus sp.），ムーコル症起因菌（R. microsporus）およびアスペルギルス症起因菌（A. fumigatus）を高感度に判別することができた．これらの起因菌をFFPE組織切片上で迅速かつ確実に検出，同定することが可能となり，真菌症治療戦略に大きく寄与することが期待される． |
| Author | 遠藤, 成朗 矢口, 貴志 長谷川, 美幸 木村, 雅友 三川, 隆 二瓶, 博義 鈴木, 真言 藤原, 恵利子 |
| Author_xml | – sequence: 1 fullname: 矢口, 貴志 organization: 千葉大学真菌医学研究センター – sequence: 1 fullname: 長谷川, 美幸 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 二瓶, 博義 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 藤原, 恵利子 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 鈴木, 真言 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 三川, 隆 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 遠藤, 成朗 organization: 株式会社LSIメディエンス – sequence: 1 fullname: 木村, 雅友 organization: 近畿大学医学部病理学講座 |
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| Copyright | 2019 一般社団法人日本医真菌学会 |
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| DOI | 10.11534/ishinkin.19-00007 |
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| PublicationTitle | 日本医真菌学会雑誌 |
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| Publisher | 一般社団法人 日本医真菌学会 |
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| References | 5) Walsh TJ, Gamaletsou MN, McGinnis MR, Hayden RT, Kontoyiannis DP: Early clinical and laboratory diagnosis of invasive pulmonary, extrapulmonary, and disseminated mucormycosis (zygomycosis). Clin Infect Dis 54 Suppl 1: S55-60, 2012. 10) 土屋紅緒，佐藤雄一，三輪治良，荻山由香：rapid in situ ハイブリダイゼーション脱アイソトープ実践プロトコール②キット簡単編，pp.250-257，秀潤社，東京，1998. 14) Louie C, Schwartz LE, Litzky LA, Nachamkin I, Montone KT: Disseminated fungal infections at autopsy:multiple fungal species identified by in situ hybridization. Pathology Case Reviews 16: 260-265, 2011. 4) 森 有紀：血液疾患におけるムーコル症の診断と治療. Med Mycol J 57: J155-J162, 2016. 12) 柴 忠義：バイオテクニシャンテキストシリーズ遺伝子工学．pp.54-57，株式会社平河工業社，東京，2001. 8) 佐藤雄一，長塩 亮，松本俊英，鉢村和男：誰でも出来るパラフィン切片を用いた高感度ISH法．組織細胞化学 2012: 73-84, 2012. 3) Kimura M, Yaguchi T, Sutton DA, Fothergill AW, Thompson EH, Wickes BL: Disseminated human conidiobolomycosis due to Conidiobolus lamprauges. J Clin Microbiol 49: 752- 756, 2011. 6) Machouart-Dubach M, Lacroix C, de Chauvin MF, Le Gall I, Giudicelli C, Lorenzo F, Derouin F: Rapid discrimination among dermatophytes, Scytalidium spp., and other fungi with a PCR-restricted fragment length polymorphism ribotyping method. J Clin Microbiol 39: 685-690, 2001. 1) Walsh TJ, Renshaw G, Andrews J, Kwon-Chung J, Cunnion RC, Pass HI, Taubenberger J, Wilson W, Pizzo PA: Invasive zygomycosis due to Conidiobolus incongruus. Clin Infect Dis 19: 423-430, 1994. 11) Sato Y, Tsuchiya B, Nagashiro R, Jiang SX, Okayasu I: A rapid and highly sensitive in situ mRNA hybridization method with digoxigenin labeled cRNA probes. J Histotechnol 29: 91-95, 2006. 15) Montone KT, Livolsi VA, Lanza DC, Feldman MD, Kennedy DW, Palmer J, Chiu AG, Nachamkin I: Rapid in situ hybridization for dematiaceous fungi using a broad-spectrum oligonucleotide DNA probe.Diagn Mol Pathol 20: 180-183, 2011. 2) Vilela R, Silva SMS, Riet-Correa F, Dominguez E, Mendoza L: Morphologic and phylogenetic characterization of Conidiobolus lamprauges recovered from infected sheep. J Clin Microbiol 48: 427-432, 2010. 16) 村山琮明：In situ での分子生物学的方法による病原真菌の検出．日菌報 53: 3-14, 2012. 13) Montone KT: In situ hybridization for ribosomal RNA sequences: a rapid sensitive method for diagnosis of infectious pathogens in anatomic pathology substrates. Acta Histochem Cytochem 27: 601-606, 1994. 7) Bialek R, Konrad F, Kern J, Aepinus C, Cecenas L, Gonzalez GM, Just-Nübling G, Willinger B, Presterl E, Lass-Flörl C, Rickerts V: PCR based identification and discrimination of agents of mucormycosis and aspergillosis in paraffin wax embedded tissue. J Clin Pathol 58: 1180-1184, 2005. 9) 三川 隆，藤原恵利子，遠藤成朗，二瓶博義：特開2014-200201（2014.10.27） 17) Hayden RT, Qian X, Procop GW, Roberts GD, Lloyd RV: In situ hybridization for the identification of filamentous fungi in tissue section. Diagn Mol Pathol 11: 119-126, 2002. |
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| SubjectTerms | in situ hybridization in vitro transcription invasive conidiobolomycosis MicroProbe System V4 domain of 18S rRNA |
| Title | パラフィン包埋組織切片上でのMicroProbe Systemを用いたin situ hybridization法によるコニディオボルス症起因菌，ムーコル症起因菌およびアスペルギルス症起因菌の18S rRNAの特異的検出法 |
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| ispartofPNX | 日本医真菌学会雑誌, 2019, Vol.60(4), pp.77-84 |
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