Chemical sterilization of culture medium for in vitro multiplication of Cochlospermum regium/Esterilizacao quimica do meio de cultura para a multiplicacao in vitro de Cochlospermum regium

• Published in: Ciência rural Vol. 48; no. 9
• Main Authors: Gavilan, Natalia Helena, Furlan, Fernanda Cardoso, Zorz, Alex Zichner, de Oliveira, Leandro Silva, Campos, Wellington Ferreira, Brondani, Gilvano Ebling
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Universidade Federal de Santa Maria 01.09.2018
• Subjects: Brasil
• ISSN: 0103-8478; 1678-4596
• DOI: 10.1590/0103-8478cr20170581

Cochlospermum regium roots are used in popular medicine and its extract has diverse phytochemical molecules some with antimicrobial activity, consequently exposing this specie to genetic erosion risks. Thus, the objective of this study was to develop an in vitro multiplication protocol using chemical sterilization of culture medium. Therefore, explants obtained from apical buds of C. regium seedlings were inoculated into with 0.05mg [L.sup.-1] NAA and 1mg [L.sup.-1] BAP sterilized by chemical agent sodium hypochlorite (NaOCl) at 0.001%, 0.003% and 0.005% of active chlorine (Cl). Autoclaved culture medium was used as control. Result showed that the contamination by bacterial at 91 days of cultivation was significantly (P<0.05) controlled by autoclaving, 0.001% and 0.005% Cl. Moreover, the callus induction in the culture medium with 0.001% and 0.005% Cl was, respectively, 30% and 20% major than autoclaving sterilization. There was not significant (P<0.05) in the percentage of shoot induction among the sterilization preparations methods, and 65% of the explants survived in the presence of culture medium with 0.005% Cl. Histological analyses indicated that the Cl did not have any deleterious effects on morphogenic events. These results indicated that the chemical sterilization using 0.001%-0.005% Cl controlled the fungal and bacterial multiplication in the culture medium and no affected the C. regium explants development, becoming it an alternative to autoclaving method. Key words: autoclaving, cerrado biome, active chlorine, in vitro cultivation. As raizes de Cochlospermum regium sao usadas na medicina popular, pois seu extrato apresenta diversas moleculas fitoquimicas, algumas com atividade antimicrobiana, que, consequentemente, expoe esta especie ao risco de erosao genetica. Assim, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de multiplicacao in vitro para explantes de C. regium usando esterilizacao quimica do meio de cultura. Gemas apicais obtidas de plantulas de C. regium germinadas in vitro foram inoculadas em meio de cultivo MS suplementado com 0,05mg [L.sup.-1] de ANA e 1mg [L.sup.-1] de BAP e esterilizado pela adicao do agente quimico hipoclorito de sodio (NaOCl) nas concentracoes de cloro ativo de 0,001%, 0,003% e 0,005%. O meio autoclavado foi utilizado como controle. Os resultados mostraram que a contaminacao por bacterias aos 91 dias de cultivo foi significativamente (P<0,05) controlada pela autoclavagem, 0,001% e 0,005% de cloro ativo. Alem disso, a inducao de calos no meio de cultura com 0,001% e 0,005% de cloro ativo foi, respectivamente, 30% e 20% maior do que na esterilizacao por autoclavagem. Nao houve diferenca significativa (P<0,05) da porcentagem de inducao de brotos entre os metodos de esterilizacao e 65% dos explantes sobreviveram na presenca de 0,005% de cloro ativo. Analises histologicas indicaram que o cloro ativo nao afetou os eventos morfogenicos. Os resultados indicaram que a esterilizacao quimica por meio do uso de 0,001%--0,005% de cloro ativo auxiliou no controle da proliferacao de bacterias e fungos no meio de cultura e nao afetou o desenvolvimento dos explantes de C. regium, tornando-a uma alternativa em relacao a autoclavagem. Palavras-chave: autoclavagem, bioma cerrado, cloro ativo, cultivo in vitro.