卵巢癌腹腔转移工具细胞的构建及其应用

• Published in: Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 44; no. 6; pp. 965 - 973
• Main Authors: 万里舟, 杜汝沛, 陈康梅
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 中山大学孙逸仙纪念医院基础与转化医学研究中心,广东 广州 510120%华南理工大学生物医学科学与工程学院,广东 广州 511442%中山大学孙逸仙纪念医院检验科,广东 广州 510120 01.11.2023; Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
• Subjects: 卵巢癌; 增强型绿色荧光蛋白; 构建; 腹腔转移; 荧光素酶; 荧光素酶; enhanced green fluorescent protein; ovarian cancer; peritoneal metastasis; 腹腔转移; luciferase; construction; 卵巢癌; 构建; 增强型绿色荧光蛋白
• ISSN: 1672-3554
• DOI: 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2023.0

R737.31; [目的]构建稳定共表达荧光素酶(Luc)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人源卵巢癌细胞SKOV3(SK-Luc-EGFP)并探究其在卵巢癌腹腔转移的体内外研究中的应用.[方法]利用重叠PCR扩增得到的Luc-T2A-EGFP基因片段,构建重组质粒pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro;采用三质粒慢病毒包装系统转染HEK 293T细胞,收集病毒液感染SKOV3细胞;通过嘌呤霉素筛选,流式细胞术检测,筛选高效表达EGFP的细胞(SK-Luc-EGFP),并通过体外生物发光实验验证Luc的表达.对SK-Luc-EGFP细胞进行如下应用的探究:利用流式细胞术和激光共聚焦区分SK-Luc-EGFP细胞与腹水微环境中的非肿瘤细胞,利用荧光显微镜观察SK-Luc-EGFP与间皮细胞的黏附,利用小动物活体成像仪观察SK-Luc-EGFP细胞的大网膜黏附以及体内成瘤的过程.[结果]成功构建慢病毒载体pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro;感染并筛选得到SK-Luc-EGFP单克隆细胞株.通过荧光显微镜和流式细胞术均能检测到EGFP的表达,细胞纯度达100%;通过流式细胞术和激光共聚焦成像可直观辨别SK-Luc-EGFP细胞与腹水微环境细胞.体外生物发光试验成功验证Luc的表达,且细胞数和生物发光信号的线性相关系数为0.997 9.细胞黏附试验中通过荧光成像直接观察到SK-Luc-EGFP细胞对间皮细胞的黏附;经腹腔注射SK-Luc-EGFP细胞观察到细胞在裸鼠大网膜上的黏附;在SK-Luc-EGFP细胞建立的卵巢癌腹腔转移模型中,利用小动物活体成像仪实现对腹腔肿瘤的活体监测.[结论]SK-Luc-EGFP细胞株在卵巢癌腹腔转移的体内外研究中具有多重应用潜力.